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    一种斜带石斑鱼亲子鉴定微卫星荧光多重PCR的方法
    31.
    发明授权
    一种斜带石斑鱼亲子鉴定微卫星荧光多重PCR的方法 有权 开放许可

    公开(公告)号：CN106947816B

    公开(公告)日：2020-08-04

    申请号：CN201710219553.X

    申请日：2017-04-06

    Applicant: 中山大学

    Inventor： 李水生 ,  陈袅 ,  张勇 ,  王登东 ,  夏军红 ,  王翔 ,  赵密 ,  刘云 ,  石和荣 ,  张海发 ,  林浩然

    IPC: C12Q1/6858 ,  C12Q1/6888

    Abstract: 本发明公开了一种斜带石斑鱼亲子鉴定微卫星荧光多重PCR的方法，包括以下步骤：(1)斜带石斑鱼个体DNA提取；(2)斜带石斑鱼多态性微卫星引物的筛选；(3)斜带石斑鱼8重PCR条件的优化和扩增；(4)亲子鉴定；本发明方法利用微卫星标记与多重荧光PCR技术结合，筛选了8个高度多态性微卫星位点，组建一个8重荧光PCR体系。利用斜带石斑鱼家系对8重荧光PCR体系进行验证，本发明所述鉴定方法操作简单、快捷、费用低廉，可以在斜带石斑鱼种质鉴定，家系管理和良种选育进行推广应用，并为增殖放流效果评估提供了一种新的技术手段。

    一种体外诱导石斑鱼卵母细胞成熟的方法
    32.
    发明公开
    一种体外诱导石斑鱼卵母细胞成熟的方法 有权

    公开(公告)号：CN110982781A

    公开(公告)日：2020-04-10

    申请号：CN201911246490.2

    申请日：2019-12-07

    Applicant: 中山大学 ,  广东海洋大学

    Inventor： 李水生 ,  唐霖 ,  陈嘉兴 ,  张勇 ,  陈华谱 ,  林浩然

    IPC: C12N5/075

    Abstract: 本发明提供了一种体外诱导石斑鱼卵母细胞成熟的方法，包括以下步骤：(1)选择石斑鱼：选取繁殖季节的石斑鱼亲鱼；(2)在体注射HCG：使用麻醉剂麻醉石斑鱼并在其背部肌肉处注射HCG，而后放回水体中等待；(3)获取石斑鱼卵子：取麻醉后的石斑鱼得到卵巢组织块，放置于培养基中，再在解剖镜下分离得到单个的卵子；(4)离体孵育分离得到的卵子：选取分离得到的卵子置于多孔细胞培养板中，加入HCG或孕酮DHP或20β-S进行离体孵育，至发生GVBD达到成熟状态，即完成石斑鱼卵母细胞体外成熟诱导。本发明方法采用体外诱导石斑鱼卵母细胞成熟，提高了催产成功率，并提供大量优质成熟鱼卵。

    一种鉴别雄性鞍带石斑鱼的方法
    34.
    发明授权
    一种鉴别雄性鞍带石斑鱼的方法 有权

    公开(公告)号：CN104808005B

    公开(公告)日：2017-03-01

    申请号：CN201510179104.8

    申请日：2015-04-15

    Applicant: 中山大学

    Inventor： 张勇 ,  王庆 ,  李水生 ,  王翔 ,  肖玲 ,  彭诚 ,  杨宇晴 ,  张海发 ,  林浩然

    IPC: G01N33/74

    Abstract: 本发明公开了一种鉴别雄性鞍带石斑鱼的方法，包括以下步骤：(1)选择鞍带石斑鱼：选择繁殖季节的鞍带石斑鱼；(2)获取鞍带石斑鱼血清：选取鞍带石斑鱼尾静脉血液，离心后获得血清；(3)测定血清中卵黄蛋白原含量：采用酶联免疫吸附法测定血清中的卵黄蛋白原含量：(4)测定血清中11-酮基睾酮含量：采用酶联免疫吸附法测定血清中的11-酮基睾酮含量；(5)鉴别鞍带石斑鱼雄鱼：结合鞍带石斑鱼血清中卵黄蛋白原含量和11-酮基睾酮含量，鉴别出鞍带石斑鱼雄鱼。该方法快速高效，对鱼的伤害小，准确性高。

    一种预防石斑鱼苗种黑身病爆发的培育方法
    35.
    发明授权
    一种预防石斑鱼苗种黑身病爆发的培育方法 失效

    公开(公告)号：CN104054596B

    公开(公告)日：2016-08-17

    申请号：CN201310681562.2

    申请日：2013-12-12

    Applicant: 中山大学

    Inventor： 张勇 ,  黄文 ,  王翔 ,  王庆 ,  彭诚 ,  李水生 ,  卢丹琪 ,  刘晓春 ,  林浩然

    IPC: A01K61/00

    CPC classification number: Y02A40/81

    Abstract: 本发明提出了一种预防石斑鱼苗种黑身病爆发的培育方法，包括以下步骤：(1)选择采光效果好，且设有充氧石和照明设备的养殖池；(2)制备大小为0.5m×0.5m×0.5m，目数为60～80目和20～30目的两种规格网箱；(3)选择在室外高位池培育得到的受精后18?22天石斑鱼幼苗；(4)利用网箱低密度养殖，每个网箱放入100?200条石斑鱼幼苗；(5)分段投喂；(6)二十天后撤除网箱高密度养殖。本发明培育的幼苗具有健康、病害少、黑身病不爆发、黑身后成活率高，无需特效药物治疗，可操作性高的特点；本发明的培育方法可使石斑鱼幼苗成活率达到85%以上，具有重大应用价值。

    斜带石斑鱼性别调控基因Rspo1及其制备方法和应用
    36.
    发明授权
    斜带石斑鱼性别调控基因Rspo1及其制备方法和应用 有权

    公开(公告)号：CN103724415B

    公开(公告)日：2015-05-27

    申请号：CN201310753282.8

    申请日：2013-12-31

    Applicant: 中山大学

    Inventor： 刘晓春 ,  王升鹏 ,  林浩然 ,  张勇

    IPC: C07K14/46 ,  C12N15/12 ,  A61K38/17 ,  A61P15/00

    Abstract: 本发明公开了斜带石斑鱼性别调控基因Rspo1及其应用。基因Rspo1的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示，全长756bp，其编码蛋白共251个氨基酸，序列如SEQ ID NO:2所示。本发明方法利用反转录PCR 技术从斜带石斑鱼中克隆到了一个斜带石斑鱼性别调控基因Rspo1，并根据实验结果说明了Rspo1可能参与调控斜带石斑鱼其他性别调控基因的表达，为相关鱼类性别调控的研究提供一定的理论依据和重要线索。基因Rspo1编码的蛋白有望应用于鱼类催产、催熟、人工调控雌雄转换、大规模工业化养殖等方面。

    斜带石斑鱼瘦素LeptinA蛋白表达纯化的方法及其应用
    38.
    发明公开
    斜带石斑鱼瘦素LeptinA蛋白表达纯化的方法及其应用 失效

    公开(公告)号：CN104450763A

    公开(公告)日：2015-03-25

    申请号：CN201410617687.3

    申请日：2014-11-04

    Applicant: 中山大学

    Inventor： 刘晓春 ,  张辉贤 ,  李水生 ,  张勇 ,  蒙子宁 ,  林浩然

    IPC: C12N15/70 ,  C07K1/22 ,  A23K1/18 ,  A61K38/17 ,  A61P15/08

    Abstract: 本发明公开了斜带石斑鱼瘦素Leptin A蛋白表达纯化的方法及其应用，瘦素蛋白Leptin A表达纯化的方法是将斜带石斑鱼瘦素Leptin A的编码基因克隆至表达载体，得到重组表达质粒，转化大肠杆菌，培养转化的大肠杆菌，经诱导后收集菌体，纯化、酶切，得到斜带石斑鱼瘦素Leptin A。本发明斜带石斑鱼瘦素Leptin A能够影响斜带石斑鱼下丘脑细胞的NPY和AgRP1基因的表达，上调垂体细胞中促性腺激素LH-β的表达，丰富了鱼类瘦素系统信号通路的理论，并可以用于制备鱼类新型催产剂，具有诱导鱼类生殖调控基因表达的作用。

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