一种猪子宫内膜来源的外泌体及其提取方法与应用

    公开(公告)号:CN111019885A

    公开(公告)日:2020-04-17

    申请号:CN201911112690.9

    申请日:2019-11-14

    IPC分类号: C12N5/073

    摘要: 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种猪子宫内膜来源的外泌体及其提取方法与应用。本发明先分离得到子宫内膜组织,然后剪碎成组织块;冲洗后在20~30℃,80~100g条件下离心3~10min,弃上清液;再将组织块置于Hanks’Balanced Salt Solution中孵育,收集猪子宫内膜培养液;最后采用超速离心法提取外泌体,得到猪子宫内膜来源的外泌体。与现有技术相比,本发明提供的方法更加简单便捷,节约了样品收集的成本,减少了人力的损耗,同时也节约了采样的时间,增加了采样的效率。提取的外泌体在电镜下外泌体形状更加明显,背景干净且无杂质,可以作为促进猪胚胎体外培养效率的添加剂。

    一种基于CRISPR/Cas9系统敲除猪细胞Y染色体的方法

    公开(公告)号:CN116064541A

    公开(公告)日:2023-05-05

    申请号:CN202211294282.1

    申请日:2022-10-21

    IPC分类号: C12N15/113 C12N15/85

    摘要: 本发明涉及一种基于CRISPR/Cas9系统敲除猪细胞Y染色体的方法,属于生物技术领域,该方法主要包括:(1)根据生物信息学找出位于Y染色体上的特异靶向重复序列并设计相应的gRNA;(2)进行CRISPR/Cas9载体的制备;(3)将构建好的载体电转入公猪胎儿成纤维细胞中,并通过q‑PCR验证其在细胞水平的靶基因表达水平下降情况;(4)选择效率较高的gRNA电转,进行流式分选稀释获取单克隆,并对单克隆进行PCR及核型分析验证。本发明在猪的特定染色体寻找能够被特异sgRNA识别的重复序列,为特定染色体及其携带基因功能的研究提供了一种新的工具,同时也为实现大型家畜性别控制提供一种新的技术方案。

    一种卵母细胞培养液及提高卵母细胞质量的体外培养方法

    公开(公告)号:CN110846272B

    公开(公告)日:2022-11-04

    申请号:CN201911231323.0

    申请日:2019-12-05

    IPC分类号: C12N5/075

    摘要: 本发明提供了一种卵母细胞培养液,该培养液中含有成熟的卵泡液。成熟的卵泡液相对于未成熟的卵泡液,成熟的卵泡液对卵母细胞体外成熟有积极作用的物质丰度更高,离成熟期越近的卵泡,它的卵泡液越能促进卵母细胞IVM,并改善其质量。使用体内成熟卵泡液作为卵母细胞体外成熟培养液的组分能有效提高卵母细胞的质量,并且能降低卵母细胞中的ROS含量。由此。不仅可以用来改善各种物种(如:牛、羊等)的卵母细胞体外成熟,提高制备优质的体外受精胚胎及克隆胚胎的生产率,还可供人类辅助生殖中卵母细胞体外培养成熟的运用提供参考,以改进现有的卵母细胞体外成熟的培养体系,从而促进生物医学的发展。

    提高基因组定点整合效率的抑制剂及其应用

    公开(公告)号:CN111394393B

    公开(公告)日:2021-10-15

    申请号:CN202010116317.7

    申请日:2020-02-25

    摘要: 本发明公开了通过筛选出可以提高基因组定点整合效率的抑制剂,包括组蛋白去乙酰化酶抑制剂或JAK抑制剂中的至少一种。组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以在基因组定点整合时,抑制组蛋白的去乙酰化,而促进组蛋白的乙酰化,进而有利于DNA与组蛋白八聚体的解离,核小体结构松弛,从而使各种转录因子和协同转录因子能与DNA结合位点特异性结合,激活基因的转录及定点整合效率。JAK抑制剂通过抑制细胞JAK自发性磷酸化,影响其与STAT蛋白结合,使STAT转录因子磷酸化不能有效转移至细胞核内,影响非DNA连接因子的结合,有利于NHEJ/HDR因子的结合,进而有效增加基因整合至基因组的概率,提高基因组定点整合效率。