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公开(公告)号:CN110547193A
公开(公告)日:2019-12-10
申请号:CN201910865660.9
申请日:2019-09-12
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种培育不结球白菜小孢子植株的方法。该方法包括如下步骤:(1)花蕾的选取;(2)培育小孢子胚胎:将花蕾消毒,清洗,1/2NLN-13培养基润洗;将润洗后的花蕾加入1/2NLN-13培养基,充分研磨,过滤,离心,黄绿色沉淀用NLN-13培养基稀释,用甲基磺酸乙酯处理后分装到培养皿中,向培养皿中加入活性炭,使其浓度为1mg/mL,热激处理,然后暗培养14天形成胚状体;(3)成熟胚萌发成植株:将胚状体振荡培养,将其中转绿的成熟胚转移到改良固体1/2MS培养基中培育40d,直接进行炼苗移栽。本发明所述方法在能够保证出胚率的情况下,简化操作步骤,大大减少了操作时间,提高了植株生产效率。
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公开(公告)号:CN108504769A
公开(公告)日:2018-09-07
申请号:CN201810592942.1
申请日:2018-06-08
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6869 , C12N15/11
Abstract: 本发明选用早开花的油用型品种‘YS-143’与晚开花的芜菁品种‘VT-044’为试材,分别观察其在长日照和短日照两个条件下的开花时间。同时以两个材料为模板克隆这个基因的cDNA序列,并利用生物信息学技术对其氨基酸序列进行分析,发现早花型和晚花型白菜类作物CCA1基因上的差异位点,并通过生物信息学、测序比对等分析得到了初步确认,开发出一个InDel标记。所述InDel分子标记的核苷酸序列为ACCCTT,位于早花型白菜类作物CCA1基因的第六个外显子上,但不存在于晚花型白菜类作物CCA1基因编码区。最后通过验证,将其作为功能标记进行分子辅助育种工作。本发明的分子标记可简便、快速、高通量地应用于育种实践。
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公开(公告)号:CN108165647A
公开(公告)日:2018-06-15
申请号:CN201810002014.5
申请日:2018-01-02
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q2600/13 , C12Q2600/156
Abstract: 本发明提供了一种用于鉴定不结球白菜苏州青、矮脚黄、乌塌菜的分子标记方法,设计了SSR分子标记引物SSR09133,以不结球白菜的DNA作为模板进行扩增,可以将未知品种的不结球白菜与苏州青、矮脚黄、乌塌菜三个品种区分开来。本方法不受植株生长发育阶段和环境的影响,具有准确性高、重复性好、操作简单、耗时短的优点,具有较高的商业应用前景,值得大范围推广。
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公开(公告)号:CN107794292A
公开(公告)日:2018-03-13
申请号:CN201711065535.7
申请日:2017-11-02
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: G01N33/5097 , G01N21/6486
Abstract: 本发明提供了一种侵染烟草的亚细胞定位试剂盒,包括缓冲试剂A1、降低植物免疫反应菌液A2、核定位农杆菌菌液A3和农杆菌感受态A4。该试剂盒利用植物抗性反应抑制蛋白抑制植物的自身免疫反应,提高农杆菌的侵染效率,增强外源目的基因的表达,从而使得荧光信号更强,更容易观察。同时因试剂盒含有核定位对照组份,避免了使用DAPI核染色过程中接触有毒等致癌物质,同时降低试验成本,减少环境污染。
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公开(公告)号:CN107557383A
公开(公告)日:2018-01-09
申请号:CN201710789234.2
申请日:2017-09-05
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种TYMV病毒诱导的十字花科内源基因沉默方法及其应用,以目标基因cDNA为模板进行PCR扩增,纯化连接载体,转化大肠杆菌,阳性克隆测序得到目的编码区全长CDS序列;根据测序后的结果选择序列为(T/A/G/C)TGA或(T/A/C)TAG或(T/A/C)TAA向后选择40bp序列;3’端加上其反向互补序列,两端再加入和线性化载体两端对应的同源序列长度为15bp的序列,合成双链DNA片段并与载体pTY-s融合连接,融合连接产物转化大肠杆菌,培养提取质粒,选择幼苗第一片真叶长出时,基因枪轰击,快速转入栽培土中培养。本发明载体构建容易,转染效率高,基因沉默效果明显,性状持久。
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公开(公告)号:CN107557381A
公开(公告)日:2018-01-09
申请号:CN201710949078.1
申请日:2017-10-12
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种白菜CRISPR-Cas9基因编辑体系的建立及其应用。设计两对sgRNA引物sGAvrIIF1/sGR1和sGF2/sGAvrIIR2,分别以pChimera sgRNA vector为模板进行PCR扩增,分别取纯化目的片段以sGAvrIIF1/sGAvrIIR2为引物进行融合PCR;将载体pCAS9-TPC与融合PCR产物酶切后融合连接,融合连接产物转化大肠杆菌,获得阳性菌落进行培养提取质粒得到植物基因编辑载体。通过本发明,可简单有效的实现了对白菜的基因编辑,对白菜转基因体系的建立也奠定了良好的基础。
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公开(公告)号:CN118147221A
公开(公告)日:2024-06-07
申请号:CN202410402075.6
申请日:2024-04-03
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/84 , C12N15/113 , C12N9/22 , A01H5/00 , A01H6/20
Abstract: 本发明公开了一种快速获得不结球白菜高Vc含量双单倍体材料的方法,所述方法根据不结球白菜GGP基因的uORF序列设计sgRNA,构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,使用根癌农杆菌侵染带柄子叶和下胚轴的方法转化不结球白菜单倍体诱导系,然后将含有基因编辑元件的单倍体诱导系与野生型不结球白菜育种材料杂交,后代经过表型和流式细胞仪鉴定和筛选得到不含基因编辑元件的不结球白菜双单倍体,然后对得到双单倍体进行基因编辑位点鉴定和Vc含量测定,快速获得不结球白菜高Vc含量双单倍体材料。采用本发明的方法可以快速获得纯合的突变体双单倍体材料,提高不结球白菜维生素C的含量,为白菜品质生物育种打下基础。
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公开(公告)号:CN118028508A
公开(公告)日:2024-05-14
申请号:CN202311599326.6
申请日:2023-11-28
Applicant: 南京农业大学 , 南京理想农业科技有限公司
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一组用于鉴定苋菜品种的引物组及其应用,该引物组为用于鉴定苋菜品种RG3和/或RG5的引物组。利用所述引物组,可构建得到DNA标记指纹图谱用于苋菜品种RG3和/或RG5的鉴定或纯度分析,该指纹图谱与常规形态学和细胞学检测相比,具有检测时间短、准确性高、重复性好的优点。
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公开(公告)号:CN116987701A
公开(公告)日:2023-11-03
申请号:CN202210440534.0
申请日:2022-04-25
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/29 , C12N15/84 , C12N15/113 , A01H5/00 , A01H6/20
Abstract: 不结球白菜BcERF070基因调控不结球白菜Vc含量中的应用,本研究验证了BcERF070基因在不结球白菜Vc合成途径中的重要作用,构建CRISPR/Cas9基因编辑载体并转化到不结球白菜中,与非转基因植株相比,转基因植株的BcERF070基因序列发生碱基替换,植株Vc含量随之下降,并进而实现了提早不结球白菜开花时间、缩短育种周期、提高蔬菜品质,为创造不结球白菜新种质提供技术支持。
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公开(公告)号:CN116515892A
公开(公告)日:2023-08-01
申请号:CN202310679807.1
申请日:2023-06-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了网格轻链蛋白在抑制TuMV侵染不结球白菜中的应用。本发明通过获得BcCLC1、BcCLC2病毒诱导的基因沉默(VIGS)诱导的沉默植株,结果表明VIGS诱导的基因沉默后,不结球白菜中BcCLC1、BcCLC2基因的相对表达水平明显下降,沉默植株接种TuMV后发现植株中病毒RNA的积累量均明显低于对照植株,这说明BcCLC1、BcCLC2基因沉默抑制TuMV的侵染,在不结球白菜抗TuMV育种具有应用前景。
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