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公开(公告)号：CN104955951A
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201380060191.4
申请日：2013-10-16
申请人： 麻省理工学院
IPC分类号： C12N15/113 , A61K48/00 , C12N5/00 , C12N5/095 , C12N15/11 , C12N15/117 , A61K31/7105
CPC分类号： A61K31/7088 , A61K31/7105 , A61K48/00 , C12N15/113 , C12N15/67 , C12N2310/15 , C12N2310/3519 , C12N2320/52
摘要： 在一些方面，本发明涉及缺乏polyA尾的杂合体RNA和用于表达所述RNA的核酸载体。在一些情况下，所述杂合体RNA具有3’末端稳定化三螺旋结构。还公开了用于体内和体外表达所述RNA的相关方法。
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公开(公告)号：CN103396995B
公开(公告)日：2015-09-23
申请号：CN201310299224.2
申请日：2013-07-16
申请人： 广州赛哲生物科技有限公司
IPC分类号： C12N5/095
摘要： 本发明公开了一种筛选乳腺癌干细胞的三维培养方法，采用水凝胶对人乳腺癌细胞进行三维培养，直接获得乳腺癌干细胞微球，所得微球细胞为ESA+CD44+/CD24-/low表型，明显具有肿瘤干细胞的特性，该发明方法是可靠的乳腺癌干细胞筛选方法。本发明操作简单，且与流式细胞仪筛选法等现有技术相比，大大降低了试剂耗材、仪器使用和人力资源等方面的成本。
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公开(公告)号：CN104531620A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201510027228.4
申请日：2015-01-20
申请人： 天津医科大学肿瘤医院
IPC分类号： C12N5/095
摘要： 本发明公开了一种肺癌干细胞条件3D培养方法，属于细胞培养方法。本发明是将人肺腺癌细胞系A549用含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基，置于培养箱中培养，取对数生长期细胞悬液，调整细胞浓度为5×104个细胞/ml，取200μL/孔加到已铺好50μL/孔BME的96孔板里；第3天，用含IGF-1和FGF的RPMI-1640完全培养基给A549细胞换液，继续培养；并经蛋白水解酶消化BME、回收液回收A549细胞，最后进行细胞鉴定。这样设计的本发明，A549细胞在体外形成类似体内肿瘤团块的克隆团，更加接近体内立体生长状态，从而实现干细胞的稳定分离、有效扩增。筛选出对抗癌药物抵抗的肿瘤干细胞。
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公开(公告)号：CN104483485A
公开(公告)日：2015-04-01
申请号：CN201410637712.4
申请日：2008-08-08
申请人： 荷兰皇家科学院
发明人： 约翰尼斯·卡洛鲁斯·克莱威尔斯 , 尼古拉斯·巴尔克尔 , 安德里亚·海格巴斯 , 马库斯·拉姆博尔特乌斯·万德韦特凌
IPC分类号： G01N33/577 , G01N33/53 , C12N5/074 , C12N5/071 , C12N5/095 , A61K35/38 , A61K35/30 , A61K35/407 , A61K35/54 , A61K35/32 , A61K35/12 , A61P35/00
CPC分类号： A61K38/177 , A61K45/06 , C12N5/068 , G01N33/5011
摘要： 本发明涉及生物化学、药学和肿瘤学领域。本发明特别地涉及新的干细胞标志物用于分离干细胞的用途。本发明还涉及获得的干细胞及它们在诸如研究或治疗中的用途，诸如用于制备治疗受损或患病组织的药物。在一实施方案中，本发明提供了用于获得(或分离)干细胞的方法，该方法包括下述步骤：任选地从组织或器官样品制备细胞悬液，使所述细胞悬液与Lgr6或Lgr5结合化合物接触，鉴定与所述结合化合物结合的细胞，以及任选地将干细胞与所述结合化合物分离。本发明还涉及适合癌症治疗的方法，甚至更具体地适合通过根除癌干细胞来治疗癌症的方法。
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公开(公告)号：CN103266084B
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201310200803.7
申请日：2013-05-27
申请人： 刘卫辉
摘要： 本发明公开了富集干细胞的三步分离法，解决现有技术分选的精确性不高，分选的成本较高的问题。本发明包括以下步骤：（1）细胞的纯化：通过差时贴壁和差时硝化的方法对原始细胞群进行纯化处理；（2）细胞的分群：通过Percoll连续密度梯度离心的方法对纯化后的细胞进行分群处理；（3）细胞的富集：通过培养液对细分群后的细胞进行培养，从中挑选出形成最大克隆球的细胞，即为干细胞。本发明将干细胞的贴壁强度特征、密度大小特征、克隆形成特征联合起来进行分选，更加精确地富集了干细胞。
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公开(公告)号：CN104312976A
公开(公告)日：2015-01-28
申请号：CN201410543007.8
申请日：2014-10-14
申请人： 广州市搏克肿瘤研究所 , 王淋立
IPC分类号： C12N5/095
摘要： 本发明公开了一种肿瘤干细胞的分离方法，该方法为将肿瘤细胞消化为单个细胞后，再加入消化酶液孵育数小时；将孵育后的细胞加入含血清的细胞培养液进行贴壁生长；细胞贴壁后换肿瘤干细胞TSC培养基进行培养；当细胞长满后，重复多次前述操作后，将获得的细胞进行微球培养，最终获得的微球即为肿瘤干细胞。本发明首次使用多种消化酶或者结合其他物理应激条件刺激多种肿瘤细胞，可以稳定地获得不同类型的TSC；本发明分离的MuseTSC拥有极强的肿瘤干性，均质性好，稳定，因此该方法的建立使获得不同类型的TSC得以标准化，并且更加简单经济，适合大规模构建TSC库所用，以满足常规肿瘤生物医学基础研究、临床研究以及药物开发等工作需求。
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公开(公告)号：CN103756966A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201310374502.6
申请日：2013-08-23
申请人： 东莞中山大学研究院
摘要： 本发明提供了一种中国人舌部鳞状上皮细胞癌细胞系CTSC-2的建立方法，为研究人舌部鳞状上皮细胞癌的特性及其治疗药物提供了物质基础。该方法包括如下具体步骤：采用组织块贴壁法进行舌部鳞状上皮细胞癌细胞的原代培养；当细胞密度达到约80%的时候进行传代培养；将传代稳定的细胞经RT-PCR检测表明细胞表达人舌部鳞状上皮细胞癌细胞标志性分子CK8、18、19；经免疫印迹实验检测贴壁细胞表达人舌部鳞状上皮细胞癌细胞标志性分子CK8、18蛋白，由此从分子水平上证明成功建立中国人舌部鳞状上皮细胞癌细胞系CTSC-2。
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公开(公告)号：CN103289958A
公开(公告)日：2013-09-11
申请号：CN201310286095.3
申请日：2013-07-09
申请人： 天津市人民医院
IPC分类号： C12N5/095
摘要： 本发明公开了一种干细胞小球诱导培养液及干细胞小球培养方法。属于细胞培养液。本发明是将原培养液培养的细胞生长至融合度达到90%，改用混合培养液培养，并在二氧化碳培养箱中第一次缺氧培养，直至90%的细胞发生死亡；剩余贴壁细胞经PBS洗涤加入原培养液继续培养增殖，待细胞密度达到90%后，重新更换混合培养液，并进行第二次缺氧培养，收集悬浮的干细胞小球。以此，在体外环境下诱导细胞连续不断产生大量干细胞小球，这些干细胞小球能表达明确的干细胞标志物：CD44，CD133，OCT3/4，Nanog，SOX-2和ABCG2等正常或者肿瘤干细胞标志物。
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公开(公告)号：CN103289957A
公开(公告)日：2013-09-11
申请号：CN201310174082.7
申请日：2013-05-13
申请人： 北京希普生国际生物医学研究院
IPC分类号： C12N5/095 , C12N5/0784 , A61K39/00 , A61P35/00 , A61P11/00
摘要： 本发明提供了一种制备干细胞样肺癌细胞的方法，其中，所述方法包括鉴定待测肺癌细胞标本中是否存在干细胞样肺癌细胞的步骤：所述步骤包括检测所述待测肺癌细胞标本中是否特异表达以下差异蛋白的至少两种：蛋白激酶Ciota、五次跨膜单链糖蛋白Prominin1、乙醛脱氢酶1或乳腺癌耐药蛋白ATP结合转运蛋白G超家族成员2。本发明还提供了制备所述干细胞样肺癌细胞抗原负载该抗原树突状细胞的方法以及通过所述方法获得的树突细胞疫苗。通过本发明的方法，仅仅通过检测以上所述蛋白的至少两种，就能够高效准确地得到干细胞样肺癌细胞，基于所述方法所得干细胞样肺癌细胞纯度高且容易富集。
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