公开(公告)号：CN103652320A

公开(公告)日：2014-03-26

申请号：CN201210342459.0

申请日：2012-09-17

申请人： 中国农业科学院饲料研究所

发明人： 滕达 ,  王建华 ,  王秀敏 ,  管庆丰

IPC分类号： A23K1/00 ,  A23K1/16

摘要： 本发明涉及一种饲用防腹泻酵母的高密度发酵及其保护冻干的活菌制剂的制备方法，属于农业生物技术领域。原始出发菌株布拉酵母(Saccharomyces boulardii，ATCC MYA-796)1株经过活化，接种到酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中，30℃，200-250rpm，培养12-16h，作为种子液；在液体扩大酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中，以10％的接种量接种种子液，30℃，800rpm，培养12h，然后流加25％葡萄糖6h，流加量为20ml/h/L发酵液；离心收集菌体加入保护剂(8％甘油，7.5％脱脂奶粉，7.5％海藻糖和0.9％氯化钠)，保护剂与菌体混合比例为2∶1，混匀后静置平衡1h；-80℃预冷12h，然后置于真空冷冻干燥机中冻干菌体，称取冻干菌粉进行活菌计数，其活菌计数达1.4×1010CFU/g。

公开(公告)号：CN102409003B

公开(公告)日：2013-05-15

申请号：CN201010291818.5

申请日：2010-09-26

申请人： 中国农业科学院饲料研究所

发明人： 王建华 ,  杨雅麟 ,  张军 ,  滕达 ,  王少然

IPC分类号： C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/69 ,  C12R1/865 ,  C12R1/84 ,  C12R1/78

CPC分类号： C12N15/81 ,  C07K14/37 ,  C07K2319/00

摘要： 本发明公开了一种多拷贝表达重组菌丝霉素的毕赤酵母的制备方法。该方法包括：根据毕赤酵母翻译的密码子偏爱性，设计出菌丝霉素表达基因的序列；将优化的菌丝霉素基因融合在表达载体pPICZαA的α-因子信号肽C端，构建单拷贝表达载体，该载体含有由起始信号元件醇氧脱氢酶强启动子(AOX)、α-因子信号肽基因及融合在其C端的菌丝霉素基因和终止信号元件AOX(TT)等组成的菌丝霉素表达盒；利用限制性内切酶BglII和BamHI粘性末端能互补的原则，通过反复酶切、连接和转化操作，获得含菌丝霉素基因的不同拷贝串联表达盒的重组质粒，电转化毕赤酵母后，在甲醇诱导下能高效分泌表达菌丝霉素，表达量与菌丝霉素基因拷贝数之间存在线性关系。本发明所构建的多拷贝高表达酵母细胞可用于提高产量、降低成本，适于菌丝霉素的规模化生产。

公开(公告)号：CN102408480A

公开(公告)日：2012-04-11

申请号：CN201010286875.4

申请日：2010-09-20

申请人： 中国农业科学院饲料研究所

发明人： 王建华 ,  白雪晶 ,  滕达 ,  杨雅麟

IPC分类号： C07K14/79 ,  C12N15/12 ,  C12N15/81

摘要： 本发明涉及的是一种基因工程抗菌蛋白的制备方法，具体地说是一种牛乳铁蛋白衍生抗菌片段BLfA的真核表达蛋白及其制备方法。从荷斯坦奶牛乳腺组织中克隆了BLfA编码基因并构建重组表达载体，实现其在毕赤酵母中表达，摇瓶和5升发酵罐最大表达量分别为485和499mg/L；利用透明颤菌血红蛋白VHb在宿主菌胞内与rBLfA共表达，表达量提高了23％，达613mg/L；rBLfA经亲和纯化，纯度为93.8％；铁结合实验表明，rBLfA的Fe3+结合能力为0.330，释放Fe3+的pH范围为7.0-3.5；rBLfA具有抑制金黄色葡萄球菌生长的功能，MIC为6.5μmol/L。

公开(公告)号：CN102191256A

公开(公告)日：2011-09-21

申请号：CN201010115167.4

申请日：2010-03-01

申请人： 中国农业科学院饲料研究所

发明人： 杨雅麟 ,  王建华 ,  滕达 ,  张军 ,  田子罡

IPC分类号： C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P21/02 ,  C07K14/37 ,  C07K1/36 ,  A61K38/16 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开重组菌丝霉素的制备及其应用，按大肠杆菌密码子偏爱性设计的菌丝霉素基因具有序列表SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，构建重组表达载体pETPlectasin和重组大肠杆菌BL21(DE3)pETPlectasin(CGMCC No.3563)，经IPTG诱导，表达融合蛋白达53.6％。采用Xa因子柱上切割可获得重组菌丝霉素，重组菌丝霉素无溶血性，可以有效的抑制革兰氏阳性菌肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌的生长，是具有治疗和防治链球菌病潜能的新型抗感染药物。

公开(公告)号：CN101990984A

公开(公告)日：2011-03-30

申请号：CN200910169666.9

申请日：2009-08-31

申请人： 中国农业科学院饲料研究所

发明人： 王建华 ,  滕达 ,  高美云 ,  杨雅麟 ,  田子罡

IPC分类号： A23K1/00 ,  A23K1/14

CPC分类号： Y02P60/877

摘要： 本发明涉及生物发酵技术领域，以豆粕和麸皮为原料，利用微生物发酵技术有效去除豆粕中的大豆抗营养因子，同时得到富含分子量低于15KDa的多肽的优质发酵豆粕，尤其是一种固态发酵的制备高抗氧化低致敏性豆粕的微生物发酵工艺。原始出发菌株米曲霉(Aspergillus oryzae，CICC 40188)1株经过活化，扩大培养后，用含有0.12％土温(Tween)80的无菌水制备孢子数目为106/ml的孢子悬浮液，作为豆粕发酵接种液。以10％的接种量接种到豆粕发酵基料中(豆粕粉碎过20目，豆粕∶麸皮＝3∶1，料水比＝1∶0.9)，混合均匀，于28℃发酵48h。于60℃烘干，对发酵前后的豆粕进行营养成分分析。

公开(公告)号：CN1485431A

公开(公告)日：2004-03-31

申请号：CN03153635.2

申请日：2003-08-19

申请人： 中国农业科学院饲料研究所 ,  王建华

发明人： 王建华 ,  滕达 ,  姚怡

IPC分类号： C12N15/81 ,  C12N15/56 ,  C12N9/46

摘要： 从芽孢杆菌菌株Bacillus licheniformis EGW039中克隆出β－1，3－1，4葡聚糖酶基因，将不带有DNA原基因信号肽编码序列的β－1，3－1，4葡聚糖酶基因插入到毕赤酵母表达载体pMETaA上，得到重组载体pMETaA－1，将pMETaA－1经酶切后得到更短的线性化重组载体pMETaA－11，用以转化毕赤酵母PMAD16得到了重组子，该基因在毕赤酵母中实现了分泌表达。将重组酵母进行诱导发酵，对重组酶进行初步酶学性质分析表明，最适反应pH约为5.5，最适反应温度约为55℃。