真菌基因定点插入突变的近原位回补方法

    公开(公告)号:CN107043778A

    公开(公告)日:2017-08-15

    申请号:CN201611041330.0

    申请日:2017-03-14

    申请人: 广西大学

    IPC分类号: C12N15/80 C12N15/65

    摘要: 本发明公开了一种真菌基因定点插入突变的近原位回补方法,将修饰过的互补基因片段和U6启动子驱动携带抗性基因特异识别序列的sgRNA表达盒与根癌农杆菌T‑质粒整合,构建以诺尔丝菌素为抗性筛选标记的根癌农杆菌介导的病原真菌基因定点互补载体;用该互补载体转化病原真菌基因插入失活突变体的孢子,依赖该突变体所携带的Cas9对靶标位点进行切割,从而实现将互补基因片段准确插入突变体的抗性基因靶标序列。发明人将该法应用于甘蔗鞭黑穗菌Δmfa2、prf或g827突变株实现了互补DNA片段的准确定点插入,使目标基因功能恢复,具有简易性、高效性和准确性,为研究病原真菌功能基因组学提供了重要工具。

    核盘菌凝集素SSL-6蛋白及其编码基因与应用

    公开(公告)号:CN106397555A

    公开(公告)日:2017-02-15

    申请号:CN201611144914.0

    申请日:2016-12-13

    发明人: 刘春林 阮颖

    CPC分类号: C07K14/37 C12N15/8282

    摘要: 本发明属于生物基因工程技术领域,具体为一种核盘菌凝集素SSL-6蛋白及其编码基因与应用。该蛋白是下述氨基酸残基序列之一:1)序列表中的SEQ ID No:1;2)将序列表中的SEQ ID No:1的氨基酸残基序列经过一至五个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且对提高油菜抗菌核病作用的蛋白质。本发明还包括含有本发明基因的重组表达载体、转基因细胞系和工程菌。核盘菌凝集素SSL-6蛋白的编码基因在油菜中的表达能显著提高油菜的抗菌核病能力。本发明为油菜抗菌核病提供了一种全新的途径。