公开(公告)号：CN118666987A

公开(公告)日：2024-09-20

申请号：CN202410954163.7

申请日：2024-07-17

申请人： 恒敬合创生物医药(浙江)有限公司

发明人： 翟富民 ,  范豪 ,  祁高富 ,  时彬 ,  黄潇 ,  黄琳 ,  朱艳

IPC分类号： C07K14/605 ,  C07K1/06 ,  C07K1/14

摘要： 本发明公开了一种司美格鲁肽的连续制备方法，属于化学制药技术领域。以二十九肽(赖氨酸被Boc保护)为起始原料，与Trt‑异丁氨酸缩合，得到三十肽中间体；Trt‑组氨酸活性酯与脱Trt三十肽中间体缩合，得到三十一肽中间体；侧链活性酯与三十一肽反应，得到司美格鲁肽前体；司美格鲁肽前体脱保护，得到司美格鲁肽。反应通过调节pH值，不分离中间态，制备司美格鲁肽。调节pH使用无机酸碱，所有反应使用水为溶剂，实现环境友好。反应总收率65％左右，HPLC纯度≥99％。

公开(公告)号：CN117757710A

公开(公告)日：2024-03-26

申请号：CN202311798215.8

申请日：2023-03-16

申请人： 恒敬合创生物医药(浙江)有限公司

发明人： 杨萍 ,  黄潇 ,  温佳红 ,  王询 ,  刘高成 ,  祁高富 ,  范豪

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/52 ,  C12N15/61 ,  C12P21/00 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供的一种高密度发酵的低内毒素大肠杆菌及其应用，通过敲除大肠杆菌TAK基因组上调控脂肪酸链合成的lpxP、lpxL、lpxM、pagP基因、参与Kdo分子的合成的gutQ基因以及参与磷酸基团修饰的eptA基因，从而使得细胞生成不含内毒素活性的Lipid IVA分子。为了改善工程菌株在Kdo合成基因缺失的情况下的生长状态，本发明对编码参与脂多糖转运蛋白的msbA基因进行了点突变。本发明制备的CleanTAK系列工程菌株内毒素显著降低，后续能够利用该工程菌株表达重组蛋白药物、疫苗抗原、抗体、食品蛋白、酶、蜘蛛丝等外源蛋白，或以其为宿主用于克隆和生产质粒，或以其为底盘构建合成次生代谢产物的工程菌，简化了蛋白、核酸及次生产物的纯化步骤，同时提高了产品的安全性。

公开(公告)号：CN116376791A

公开(公告)日：2023-07-04

申请号：CN202310253436.0

申请日：2023-03-16

申请人： 恒敬合创生物医药(浙江)有限公司

发明人： 杨萍 ,  黄潇 ,  温佳红 ,  王询 ,  刘高成 ,  祁高富 ,  范豪

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/52 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12P21/00 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供的一种高密度发酵的低内毒素大肠杆菌及其应用，通过敲除大肠杆菌TAK基因组上调控脂肪酸链合成的lpxP、lpxL、lpxM、pagP基因、参与Kdo分子的合成的gutQ基因以及参与磷酸基团修饰的eptA基因，从而使得细胞生成不含内毒素活性的Lipid IVA分子。为了改善工程菌株在Kdo合成基因缺失的情况下的生长状态，本发明对编码参与脂多糖转运蛋白的msbA基因进行了点突变。本发明制备的CleanTAK系列工程菌株内毒素显著降低，后续能够利用该工程菌株表达重组蛋白药物、疫苗抗原、抗体、食品蛋白、酶、蜘蛛丝等外源蛋白，或以其为宿主用于克隆和生产质粒，或以其为底盘构建合成次生代谢产物的工程菌，简化了蛋白、核酸及次生产物的纯化步骤，同时提高了产品的安全性。

公开(公告)号：CN117757710B

公开(公告)日：2024-06-04

申请号：CN202311798215.8

申请日：2023-03-16

申请人： 恒敬合创生物医药(浙江)有限公司

发明人： 杨萍 ,  黄潇 ,  温佳红 ,  王询 ,  刘高成 ,  祁高富 ,  范豪

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/52 ,  C12N15/61 ,  C12P21/00 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供的一种高密度发酵的低内毒素大肠杆菌及其应用，通过敲除大肠杆菌TAK基因组上调控脂肪酸链合成的lpxP、lpxL、lpxM、pagP基因、参与Kdo分子的合成的gutQ基因以及参与磷酸基团修饰的eptA基因，从而使得细胞生成不含内毒素活性的Lipid IVA分子。为了改善工程菌株在Kdo合成基因缺失的情况下的生长状态，本发明对编码参与脂多糖转运蛋白的msbA基因进行了点突变。本发明制备的CleanTAK系列工程菌株内毒素显著降低，后续能够利用该工程菌株表达重组蛋白药物、疫苗抗原、抗体、食品蛋白、酶、蜘蛛丝等外源蛋白，或以其为宿主用于克隆和生产质粒，或以其为底盘构建合成次生代谢产物的工程菌，简化了蛋白、核酸及次生产物的纯化步骤，同时提高了产品的安全性。

公开(公告)号：CN118956836A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411090404.4

申请日：2024-08-09

申请人： 恒敬合创生物医药(浙江)有限公司

发明人： 翟富民 ,  范豪 ,  祁高富 ,  曹逸 ,  黄潇 ,  温佳红

IPC分类号： C12N9/76

摘要： 本发明公开了一种抗自切化学修饰胰蛋白酶的制备方法，包括以下步骤：步骤1)、配制修饰剂溶液；所述修饰剂包括乙二醇单甲磺酸酯或PEG单甲磺酸酯；步骤2)、使用5mM氯化钙溶液配制5～20mg/ml的胰蛋白酶；步骤3)、取步骤2)配制的胰蛋白酶溶液，添加步骤1)中配制的修饰剂溶液，搅拌，进行修饰反应；步骤4)、将步骤3)中的反应产物进行超滤、稀释，得到羟乙基化胰蛋白酶或PEG化胰蛋白酶。本发明实现了胰蛋白酶稳定性的显著提升，极大地减少了胰蛋白酶因自切带来的酶活损失和对应用效果的干扰，为将来实现高稳定胰蛋白酶的生产建立了重要的基础。

公开(公告)号：CN118879783A

公开(公告)日：2024-11-01

申请号：CN202410888049.9

申请日：2024-07-04

申请人： 恒敬合创生物医药(浙江)有限公司

发明人： 孙惠婉 ,  温佳红 ,  黄潇 ,  姚旭涛 ,  祁高富 ,  范豪

IPC分类号： C12N15/87 ,  C07K7/06 ,  C07K1/107 ,  A61K47/64 ,  A61K31/7088 ,  A61K31/713 ,  A61K48/00 ,  A61K39/00 ,  A61K9/08

摘要： 本发明公开了一种用于包裹核酸药物的环状脂肽载体，包括由七肽R1R2R2R3R1R2R2与碳链长度为6～44的β‑羟基脂肪酸形成的环状内酯结构，其结构通式如下：#imgabs0#式中R1为碱性氨基酸，包括组氨酸His、赖氨酸Lys或精氨酸Arg中的一种，R2为疏水性氨基酸亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile或缬氨酸Val中的一种，R3为任意氨基酸中的一种；n为2～40的整数；所述环状脂肽中带正电的碱性氨基酸与带负电的核酸药物通过静电相互作用结合，形成环状脂肽‑核酸颗粒。本发明提供的用于包裹核酸药物的环状脂肽载体，安全性高，可以有效保护核酸药物，提高其稳定性的同时，对多种细胞具有良好的转染效率，在核酸药物递送领域具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN118852399A

公开(公告)日：2024-10-29

申请号：CN202411034621.1

申请日：2024-07-31

申请人： 恒敬合创生物医药(浙江)有限公司

发明人： 翟富民 ,  范豪 ,  祁高富 ,  时彬 ,  黄潇 ,  黄琳

IPC分类号： C07K14/605 ,  C07K1/107

摘要： 本发明公开了一种索马鲁肽的合成方法，以二十九肽为原料，水为溶剂，通过调节反应体系中的pH，控制反应的进程；主要包括如下步骤：1)二十九肽与侧链活性酯以纯水为溶剂进行反应，得到中间体；2)将中间体与二肽活性酯进行缩合反应，得到索马鲁肽前体；3)将索马鲁肽前体脱保护，得到索马鲁肽粗品。本发明提供的索马鲁肽的合成方法中，采用连续化反应，通过无机酸碱调节pH的情况下，不分离中间态，制备索马鲁肽；采用纯水作为溶剂，环境友好；制备的索马鲁肽收率达75％以上，HPLC纯度≥99％。

公开(公告)号：CN118291598A

公开(公告)日：2024-07-05

申请号：CN202410496471.X

申请日：2024-04-24

申请人： 恒敬合创生物医药(浙江)有限公司

发明人： 唐征宇 ,  黄潇 ,  温佳红 ,  平宪卿 ,  杨洋 ,  连志福 ,  王世宝

IPC分类号： C12Q1/686 ,  C12Q1/6876 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q1/34 ,  C12N9/16 ,  C12N15/70 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19

摘要： 本公开提供了一种高通量筛选包涵体形式表达的突变体蛋白的方法。该方法包括：通过易错PCR技术扩增来源于真核生物蛋白的活性结构域基因，得到扩增产物；将扩增产物与载体连接，得到连接产物；将连接产物转化至大肠杆菌感受态细胞中，得到突变体文库；在细胞培养微板中对突变体文库中的阳性转化子进行培养和诱导，得到诱导后的阳性转化子；将诱导后的阳性转化子进行原位裂解，得到包涵体；向包涵体中加入变性缓冲液，震荡后，加入复性缓冲液，于冰上缓慢摇晃后，再静置于低温环境中，得到复性产物蛋白；对所述复性产物进行活性检测和筛选，得到所述突变体蛋白。本公开提供的方法可高通量筛选获得酶活性显著提高的突变体蛋白。

公开(公告)号：CN221832016U

公开(公告)日：2024-10-15

申请号：CN202323542769.X

申请日：2023-12-25

申请人： 恒敬合创生物医药(浙江)有限公司

发明人： 杨洋 ,  秦朝阳 ,  孔祥召

IPC分类号： B01D61/00 ,  B01D65/08

摘要： 本实用新型提供一种重组大肠杆菌表达蛋白发酵液预处理装置，涉及重组大肠杆菌表达蛋白发酵液预处理技术领域，该重组大肠杆菌表达蛋白发酵液预处理装置包括加热筒、入料口、套筒、加热棒、叶片、环形筒、过滤膜、进气管、集气腔、分气管、排气块，环形筒的下端设置有收集筒，收集筒的底部设置有排料管，环形筒的底部设置有支撑脚，该装置能够对进入到加热筒内的发酵液实现加热，以提高发酵液的温度，增加其流动性，便于发酵液通过过滤膜，并且通过排气块产生大量的气泡，气泡破裂产生的冲击力作用在过滤膜上，可以将过滤膜上的破裂细胞膜以及其他较大的杂质的位置不停的改变，从而可以减少对过滤膜的堵塞，提高预处理的效果以及处理效率。

公开(公告)号：CN221608070U

公开(公告)日：2024-08-27

申请号：CN202323483292.2

申请日：2023-12-20

申请人： 恒敬合创生物医药(浙江)有限公司

发明人： 连志福 ,  徐达亮 ,  王江隽

IPC分类号： C12M1/12 ,  C12M1/00

摘要： 本实用新型提供一种大肠杆菌发酵液膜分离装置，涉及大肠杆菌加工技术领域，该大肠杆菌发酵液膜分离装置包括安装架、立杆、进液管道、出液管道，进液管道与出液管道的外表面均间隔设置有连接管，连接管上设置有阀门，进液管道和出液管道之间设置有连接板，连接板的一侧设置有定位卡槽，定位卡槽的内部设置有过滤管，过滤管的两端分别设置有输送管，还包括可折叠的软管，软管的一端与连接管的一端密封连接，软管的另一端与输送管螺纹连接，该装置能够通过设置的定位卡槽、软管以及阀门，可以将任何一个过滤管单独的从分离装置上拆卸下来，更换和维护方便，同时不会影响其余过滤管的正常使用，能够保证生产的持续进行，使用效果好。