公开(公告)号：CN108384804A

公开(公告)日：2018-08-10

申请号：CN201810136202.7

申请日：2018-02-09

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 孙建和 ,  程玉强 ,  朱雯娴 ,  严亚贤

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明提供了一种鸡TBK1基因的小干扰RNA质粒的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：S1、设计针对鸡TBK1的两条干扰靶序列；S2、根据步骤S1设计的两条干扰靶序列，分别合成用于构建shRNA片段的两组互补的单链DNA序列，并分别在所述两组互补的单链DNA序列中引入相应的酶切位点；S3、将所述两组互补的单链DNA序列分别经变性退火后，分别形成带有黏末端的双链DNA片段；然后，分别将所述双链DNA片段与载体连接，得到所述鸡TBK1基因的小干扰RNA。我们通过细胞水平实验，证实本发明构建的靶向鸡TBK1小干扰RNA的干扰质粒能高效特异性抑制鸡TBK1基因的表达，为深入研究TBK1在鸡抗病毒先天免疫中的作用提供了平台。

公开(公告)号：CN108384804B

公开(公告)日：2021-03-09

申请号：CN201810136202.7

申请日：2018-02-09

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 孙建和 ,  程玉强 ,  朱雯娴 ,  严亚贤

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明提供了一种鸡TBK1基因的小干扰RNA质粒的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：S1、设计针对鸡TBK1的两条干扰靶序列；S2、根据步骤S1设计的两条干扰靶序列，分别合成用于构建shRNA片段的两组互补的单链DNA序列，并分别在所述两组互补的单链DNA序列中引入相应的酶切位点；S3、将所述两组互补的单链DNA序列分别经变性退火后，分别形成带有黏末端的双链DNA片段；然后，分别将所述双链DNA片段与载体连接，得到所述鸡TBK1基因的小干扰RNA。我们通过细胞水平实验，证实本发明构建的靶向鸡TBK1小干扰RNA的干扰质粒能高效特异性抑制鸡TBK1基因的表达，为深入研究TBK1在鸡抗病毒先天免疫中的作用提供了平台。