一种基于CRISPR/RfxCas13d系统的特异性敲低植物circRNA的方法

    公开(公告)号:CN117511942A

    公开(公告)日:2024-02-06

    申请号:CN202311463065.5

    申请日:2023-11-06

    摘要: 本发明公开了一种基于CRISPR/RfxCas13d系统的特异性敲低植物circRNA的方法,包括以下步骤:S1、设计并合成植物密码子偏好性的编码RfxCas13d的目的基因序列,构建pCAMBIA1300‑RfxCas13d重组载体;S2、合成AtU6‑crRNA基因片段,所述AtU6‑crRNA基因片段包含两个BsaI酶切位点,构建pENTR4:gRNA4‑AtU6‑crRNA重组载体;S3、合成构建特异性靶向植物circRNA BSJ位点的pCAMBIA1300‑RfxCas13d‑BSJ‑crRNA载体;S4、将构建好的pCAMBIA1300‑RfxCas13d‑BSJ‑crRNA表达载体介导转入植物愈伤组织,通过组织培养获得特异性敲低植物circRNA的转基因植株;本发明极大的加快植物circRNA的功能研究,进而实现植物育种中circRNA功能增益突变体和新种质的开发。

    修饰水稻OsSWEET基因启动子培育广谱抗白叶枯病水稻的方法

    公开(公告)号:CN110317828A

    公开(公告)日:2019-10-11

    申请号:CN201910698527.9

    申请日:2019-07-31

    摘要: 本发明涉及修饰水稻OsSWEET基因启动子培育广谱抗白叶枯病水稻的方法。将核苷酸序列TACTGTACACCACCAAAAGT、ATATAAAAGCACCACAACTC和CCTCCAACCAGGTGCTAAGC同时构建于CRISPR/Cas9系统中,借助农杆菌介导的转基因体系,在水稻华占中定点突变OsSWEET11、OsSWEET13和OsSWEET14基因,获得了OsSWEET11、OsSWEET13和OsSWEET14基因启动子同时突变的水稻材料MS134HZ,广谱抗水稻白叶枯病。MS134HZ的感病基因OsSWEET11、OsSWEET13和OsSWEET14启动子EBE同时被修饰,抗白叶枯病能力提高且更广谱。在实际应用中可通过突变的MS134HZ植株与其它水稻品种杂交,培育抗病品系。