一种兰州百合叶肉原生质体的分离纯化方法

    公开(公告)号:CN118703417A

    公开(公告)日:2024-09-27

    申请号:CN202411072271.8

    申请日:2024-08-06

    Abstract: 本发明的兰州百合原生质体分离纯化及应用,将丝状的兰州百合叶片投入酶解液中酶解2‑5h后,加入等体积的1×CPW溶液终止酶的反应;酶解液为含0.4 mol/L甘露醇、0.5‑2m/v%纤维素酶和0.5‑1m/v%离析酶的CPW溶液;再用75μm的细胞筛过滤,将原生质体释放至圆底管中,离心去除上清,用CPW溶液重悬原生质体;吸取原生质体悬浮液,缓慢滴入添加含蔗糖20‑28m/v%的CPW溶液中,离心后吸出中间层的原生质体。其通过从兰州百合的生长状态、酶的添加量、酶解时间、纯化方式、渗透压浓度等多个维度,提高原生质体的分离效率和活性;所得原生质体可有效的应用于瞬时转化和体细胞融合。

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