公开(公告)号：CN108504657B

公开(公告)日：2019-06-14

申请号：CN201810325470.3

申请日：2018-04-12

申请人： 中南民族大学

发明人： 彭勇波 ,  许文豪 ,  梁大焱

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

摘要： 本发明提供了一种CRISPR‑CAS9技术敲除HEK293T细胞KDM2A基因的方法，步骤如下：(1)、细胞转染；(2)、细胞基因组提取；(3)、PCR鉴定；(4)、基因水平验证；(5)、蛋白水平验证：在基因水平验证突变细胞株后，用蛋白质免疫印迹(Western blotting)进一步验证K3、K7‑1和K7‑2是KDM2A基因缺陷型。本发明还同时提供了利用上述方法制备的KDM2A基因敲除的HEK293T细胞系及以其作为细胞模型在研究KDM2A甲基化酶所涉及的细胞增殖和凋亡信号通路中的应用。

公开(公告)号：CN108504657A

公开(公告)日：2018-09-07

申请号：CN201810325470.3

申请日：2018-04-12

申请人： 中南民族大学

发明人： 彭勇波 ,  许文豪 ,  梁大焱

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

CPC分类号： C12N15/113 ,  C12N5/0603 ,  C12N5/0686 ,  C12N9/0071 ,  C12N9/22 ,  C12N15/85 ,  C12N15/907 ,  C12N2310/10 ,  C12N2510/00 ,  C12Y114/11027

摘要： 本发明提供了一种CRISPR-CAS9技术敲除HEK293T细胞KDM2A基因的方法，步骤如下：(1)、细胞转染；(2)、细胞基因组提取；(3)、PCR鉴定；(4)、基因水平验证；(5)、蛋白水平验证：在基因水平验证突变细胞株后，用蛋白质免疫印迹(Western blotting)进一步验证K3、K7-1和K7-2是KDM2A基因缺陷型。本发明还同时提供了利用上述方法制备的KDM2A基因敲除的HEK293T细胞系及以其作为细胞模型在研究KDM2A甲基化酶所涉及的细胞增殖和凋亡信号通路中的应用。