公开(公告)号：CN110862968A

公开(公告)日：2020-03-06

申请号：CN201911044827.1

申请日：2019-10-30

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  张克山 ,  闫鸣昊 ,  郝军红 ,  田宏 ,  李丹 ,  朱紫祥 ,  茹毅 ,  杨帆 ,  张大俊 ,  刘湘涛

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/90 ,  C12N15/54 ,  C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及MAP3K8基因敲除PK-15细胞系的构建方法及其应用。MAP3K8基因敲除的PK-15细胞系PK-15-KO-MAP3K8的保藏编号为CCTCC NO:C2019176。该细胞系的构建方法包括1：根据猪源MAP3K8基因序列分别设计两条sgRNA，将双链sg RNA与酶切后的lentiGuide-EGFP载体连接得到重组慢病毒表达质粒lentiGuide-EGFP-MAP3K8-sg RNA；2：将重组慢病毒表达质粒、病毒包装辅助质粒共转染PK-15细胞；3：收集病毒液，过滤、超速离心浓缩纯化病毒；4：用感染复数MOI=30的慢病毒感染PK-15细胞，然后用超速流式细胞分选系统进行单细胞分选；5：将分选得到的单克隆细胞进行扩大培养并测序鉴定。该细胞系能够促进FMDV和SVV增殖，提高病毒产量，可用于FMDV和SVV疫苗株的大规模细胞化培养和生产，并可为研究MAP3K8在病毒感染过程中的作用机制提供有力工具。

公开(公告)号：CN111549059A

公开(公告)日：2020-08-18

申请号：CN202010360252.0

申请日：2020-04-30

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  张克山 ,  闫鸣昊 ,  郝军红 ,  申超超 ,  朱紫祥 ,  李丹 ,  田宏 ,  茹毅 ,  杨帆 ,  曹伟军 ,  刘湘涛

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N7/00 ,  A61K39/125 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种TPL2基因敲除的HEK293T细胞系及其构建方法和应用。本发明提供TPL2基因敲除HEK293T细胞系的构建方法，将人TPL2基因的第二外显子区域作为靶序列，具体的，将SEQ ID NO:1的TPL2等位基因1和等位基因2第二外显子的第390～459bp序列或第391～448bp序列作为靶序列。本发明提供TPL2基因敲除HEK293T细胞系HEK293T-KO-TPL2，其保藏编号为CCTCC NO:C2019328。本发明获得的敲除细胞系形态、增殖速度等方面均与对照细胞无明显差异，是较为理想的TPL2敲除细胞模型；改造后细胞系稳定，为探究TPL2蛋白抑制病毒复制的方式及病毒致病机理提供关键的生物材料，也可用于分离和培养SVA以及在SVA疫苗株的大规模细胞化培养和生产中进行应用。