公开(公告)号：CN105861555B

公开(公告)日：2019-05-14

申请号：CN201610309169.4

申请日：2016-05-11

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Inventor： 王晓钧 ,  张翔 ,  郭巍 ,  张振宇 ,  胡哲

IPC: C12N15/85 ,  C12N7/01

Abstract: 本发明公开了一种双向转录/表达质粒及其在流感病毒反向遗传学中的应用。本发明的一种双向转录/表达质粒是以真核表达载体pEF4/myc‑His B为骨架进行改造得到的。为了建立马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)的反向遗传操作系统，本发明使用构建得到的双向转录/表达质粒双向分别表达马流感病毒PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、NS以及M基因，通过共转染、测序、生长曲线的绘制和酶切鉴定，成功拯救得到一株EIV及其突变体。同时与现有的pBD系统进行产毒量的比较，表明本发明建立的反向遗传操作系统优于pBD系统。本发明的提出为流感病毒的反向遗传研究提供了一种新的技术手段，同时也为日后深入研究马流感病毒的传播，致病机理，乃至疫苗候选株的筛选奠定了坚实基础。

公开(公告)号：CN105861555A

公开(公告)日：2016-08-17

申请号：CN201610309169.4

申请日：2016-05-11

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Inventor： 王晓钧 ,  张翔 ,  郭巍 ,  张振宇 ,  胡哲

IPC: C12N15/85 ,  C12N7/01

CPC classification number: C12N15/85 ,  C12N7/00 ,  C12N2760/16121 ,  C12N2760/16151 ,  C12N2800/107

Abstract: 本发明公开了一种高效的双向转录/表达质粒及其在流感病毒反向遗传学中的应用。本发明的一种双向转录/表达质粒是以真核表达载体pEF4/myc?His B为骨架进行改造得到的。为了建立马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)的反向遗传操作系统，本发明使用构建得到的双向转录/表达质粒双向分别表达马流感病毒PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、NS以及M基因，通过共转染、测序、生长曲线的绘制和酶切鉴定，成功拯救得到一株EIV及其突变体。同时与现有的pBD系统进行产毒量的比较，表明本发明建立的反向遗传操作系统优于pBD系统。本发明的提出为流感病毒的反向遗传研究提供了一种新的技术手段，同时也为日后深入研究马流感病毒的传播，致病机理，乃至疫苗候选株的筛选奠定了坚实基础。