公开(公告)号：CN109652429B

公开(公告)日：2022-06-03

申请号：CN201811506327.0

申请日：2018-12-10

申请人： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

发明人： 步志高 ,  胡森 ,  许达

IPC分类号： C12N15/31 ,  C07K14/23 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12N1/20 ,  C12N15/74 ,  C12N15/66

摘要： 本发明公开了一种与布鲁氏菌毒力相关的基因及其在布鲁氏菌毒力评价以及制备弱毒布鲁氏菌中的应用。本发明利用同源重组的方法，以卡那霉素基因替换布鲁氏菌M28核糖体基因L31，构建了布鲁氏菌L31基因缺失株M28ΔL31。利用巨噬细胞RAW264.7和Babl/c小鼠模型评价了布鲁氏菌L31基因对布鲁氏菌M28毒力的影响。结果显示：L31基因缺失后并不会对M28的生长产生影响，但能显著下调强毒株M28在鼠巨噬细胞系RAW264.7和小鼠脾脏内复制生存的能力，M28ΔL31中将L31基因回补后其毒力能够恢复到野生株水平，证实该基因是布鲁氏菌M28的毒力相关基因。本发明的提出预示该毒力基因可能用于布鲁氏菌新疫苗的研发，具有潜在的应用价值。

公开(公告)号：CN109593761A

公开(公告)日：2019-04-09

申请号：CN201811572734.1

申请日：2018-12-21

申请人： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

发明人： 步志高 ,  胡森 ,  许达

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N1/21 ,  A61K39/10 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

摘要： 本发明公开了一种与布鲁氏菌毒力相关的small RNA及其在制备弱毒布鲁氏菌中的应用。本发明应用Northern blot证明在布鲁氏菌强毒株M28中存在sRNA Clu7，利用同源重组的方法，构建了该sRNA缺失株M28ΔClu7，以鼠巨噬细胞RAW264.7和Balb/c小鼠为模型评估了该sRNA对M28毒力的影响。结果显示该sRNA缺失后能显著下调强毒株M28在鼠巨噬细胞RAW264.7和小鼠脾脏内复制生存的能力。在接种第5周时，M28ΔClu7从小鼠体内完全清除，与M28相比毒力显著下降。小鼠攻毒保护实验显示：免疫M28ΔClu7对小鼠抵抗强毒M28感染的保护效果达到了疫苗株M5-90的保护力。以上结果预示着sRNA Clu7对布鲁氏菌的毒力有巨大的决定作用。本发明的提出对揭示布鲁氏菌毒力机制起到了巨大的推动作用。为布鲁氏菌新候选疫苗株的研发提供了新的技术手段。

公开(公告)号：CN117736946A

公开(公告)日：2024-03-22

申请号：CN202211154752.4

申请日：2022-09-21

申请人： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

发明人： 步志高 ,  胡森 ,  许达

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C12N15/74 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  A61K39/02 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

摘要： 本发明公开一种减毒的布鲁氏菌毒株及其制备方法与应用，属于病毒减毒的技术领域。为了解决弱化布鲁氏菌毒力，筛选制备新的弱毒疫苗的技术问题。本发明提供一种减毒的布鲁氏菌毒株，是以布鲁氏菌为母本毒株，将母本毒株中的SEQ ID NO.1所示的基因进行突变所得到的。本发明首次验证到该A1715基因与布鲁氏菌毒力至弱相关，缺失后能降低布鲁氏菌在细胞内和小鼠体内的存活能力，具有潜在的应用价值。

公开(公告)号：CN109652429A

公开(公告)日：2019-04-19

申请号：CN201811506327.0

申请日：2018-12-10

申请人： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

发明人： 步志高 ,  胡森 ,  许达

IPC分类号： C12N15/31 ,  C07K14/23 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/04 ,  C12N1/20 ,  C12N15/74 ,  C12N15/66

摘要： 本发明公开了一种与布鲁氏菌毒力相关的基因及其在布鲁氏菌毒力评价以及制备弱毒布鲁氏菌中的应用。本发明利用同源重组的方法，以卡那霉素基因替换布鲁氏菌M28核糖体基因L31，构建了布鲁氏菌L31基因缺失株M28ΔL31。利用巨噬细胞RAW264.7和Babl/c小鼠模型评价了布鲁氏菌L31基因对布鲁氏菌M28毒力的影响。结果显示：L31基因缺失后并不会对M28的生长产生影响，但能显著下调强毒株M28在鼠巨噬细胞系RAW264.7和小鼠脾脏内复制生存的能力，M28ΔL31中将L31基因回补后其毒力能够恢复到野生株水平，证实该基因是布鲁氏菌M28的毒力相关基因。本发明的提出预示该毒力基因可能用于布鲁氏菌新疫苗的研发，具有潜在的应用价值。

公开(公告)号：CN109593761B

公开(公告)日：2022-04-22

申请号：CN201811572734.1

申请日：2018-12-21

申请人： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

发明人： 步志高 ,  胡森 ,  许达

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N1/21 ,  A61K39/10 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

摘要： 本发明公开了一种与布鲁氏菌毒力相关的small RNA及其在制备弱毒布鲁氏菌中的应用。本发明应用Northern blot证明在布鲁氏菌强毒株M28中存在sRNA Clu7，利用同源重组的方法，构建了该sRNA缺失株M28ΔClu7，以鼠巨噬细胞RAW264.7和Balb/c小鼠为模型评估了该sRNA对M28毒力的影响。结果显示该sRNA缺失后能显著下调强毒株M28在鼠巨噬细胞RAW264.7和小鼠脾脏内复制生存的能力。在接种第5周时，M28ΔClu7从小鼠体内完全清除，与M28相比毒力显著下降。小鼠攻毒保护实验显示：免疫M28ΔClu7对小鼠抵抗强毒M28感染的保护效果达到了疫苗株M5‑90的保护力。以上结果预示着sRNA Clu7对布鲁氏菌的毒力有巨大的决定作用。本发明的提出对揭示布鲁氏菌毒力机制起到了巨大的推动作用。为布鲁氏菌新候选疫苗株的研发提供了新的技术手段。