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公开(公告)号：CN114107371B
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202111482446.9
申请日：2021-12-06
申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所
IPC分类号： C12N15/82 , C12N15/113 , A01H5/00 , A01H6/82
摘要： 本发明公开CGMMV基因介导转基因烟草方法。针对现有技术不能利用重组质粒构建含CGMMV来源基因片段的具有发卡结构的ihpRNAi植物表达载体并能成功获得抗性烟草的方法的缺陷，本发明首先提供重组质粒pHellsgate2‑N及其构建方法。该重组载体是将CGMMV基因片段与干涉载体pHellsgate2进行重组反应构建获得。本发明还由该重组质粒转化得到的烟草干涉表达ihpRNAi载体及其构建方法。发明还提供CGMMV Helicase基因、完整外壳基因在病毒基因介导抗性烟草培育中的应用，以及经筛选得到的目的片段He1、He2、He3。
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公开(公告)号：CN114150003B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202111482440.1
申请日：2021-12-06
申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所
IPC分类号： C12N15/40 , C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/82
摘要： 本发明公开黄瓜绿斑驳花叶病毒基因间隔区域在抗性烟草培育中的应用。针对现有技术未公开对CGMMV基因间隔区域的注释，也没有构思过从间隔区域筛选目的片段用于抗性烟草培育，本发明提供CGMMV基因间隔区域在介导抗性烟草培育中的应用。本发明筛选出三条CGMMV基因间隔区域片段IR1、IR2、IR3，同时构建嵌合结构IMC，均能成功用于植物干涉载体实现抗性烟草培育。本发明还提供利用这些目的片段介导转基因抗性烟草的完整技术方案。
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公开(公告)号：CN110951917A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911257573.1
申请日：2019-12-10
申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所
摘要： 本发明涉及一种快速检测瓜类病毒的RNA-RP RT-PCR方法，将感染病毒的瓜类植物叶片采用PBST+2%PVP溶液或0.5%Triton X-405 PBS溶液匀浆，提取样品病毒RNA于上清液中，以此上清液用于一步RT-PCR扩增病毒目标片段，从而检测瓜类病毒。本发明仅需微量样品即可获得足量的RNA模板，用于对瓜类植物中的西瓜、甜瓜、黄瓜和西葫芦及模式植物本生烟进行黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus，CGMMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、小西葫芦黄花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus，ZYMV）、西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus，WMV）、番木瓜环斑病毒（Papaya ring spot virus，PRSV）和南瓜花叶病毒（Squash mosaic virus，SqMV）等6种病毒的检测，方法灵敏度高、结果准确，操作简单和快速，提供了瓜类病毒新的检测方法。
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公开(公告)号：CN105331629B
公开(公告)日：2018-10-16
申请号：CN201510694325.9
申请日：2015-10-23
申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所
摘要： 本发明涉及一种黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染性克隆重组载体、黄化突变体及其构建方法，以黄瓜绿斑驳花叶病毒为材料，将其基因组6.4Kb克隆到植物表达载体pXT1中，获得对寄主植物有高效侵染能力的病毒载体pXT1‑CGMMV，并在此基础上对病毒序列进行单一位点突变，获得一株侵染力较强、能使寄主产生黄化症状的突变载体pCGMMV‑CP‑L25A，该突变体的获得为揭示黄瓜绿斑驳花叶病毒花叶症状的产生机制奠定了基础，也为揭示该病毒各基因的功能提供了新的研究方法。
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公开(公告)号：CN114958898A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210548808.8
申请日：2022-05-20
申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所
摘要： 本发明属于微生物领域，涉及菜豆壳球孢的遗传转化，特别是指PEG介导的菜豆壳球孢遗传转化体系的建立方法及其应用。将活化好的菜豆壳球孢菌丝，经研磨再振荡培养后，用三层滤纸过滤收集沉淀，沉淀经KCl溶液洗涤后，转移至裂解液中经摇床培养获得原生质体；向原生质体悬浮液中加入目的质粒，再逐滴加入40%SPTC溶液，再加入TB3培养液，制备恢复好的菌丝；将菌丝转入含有筛选抗生素的PDA培养基中，进行平板筛选培养，获得转化子；利用PEG介导将gfp基因转化至菜豆壳球孢中，转化子经5代转接后，仍能检测到目的gfp基因。转化后的菌株接种甜瓜后表现出与原始菌株一致的致病性，表明成功构建了菜豆壳球孢的遗传转化体系。
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公开(公告)号：CN114150003A
公开(公告)日：2022-03-08
申请号：CN202111482440.1
申请日：2021-12-06
申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所
IPC分类号： C12N15/40 , C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/82
摘要： 本发明公开黄瓜绿斑驳花叶病毒基因间隔区域在抗性烟草培育中的应用。针对现有技术未公开对CGMMV基因间隔区域的注释，也没有构思过从间隔区域筛选目的片段用于抗性烟草培育，本发明提供CGMMV基因间隔区域在介导抗性烟草培育中的应用。本发明筛选出三条CGMMV基因间隔区域片段IR1、IR2、IR3，同时构建嵌合结构IMC，均能成功用于植物干涉载体实现抗性烟草培育。本发明还提供利用这些目的片段介导转基因抗性烟草的完整技术方案。
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公开(公告)号：CN109385448B
公开(公告)日：2020-11-27
申请号：CN201811238340.2
申请日：2018-10-23
申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所
摘要： 本发明涉及一种南瓜花叶病毒侵染性克隆载体及其构建方法，以南瓜花叶病毒为材料，将基因组5.8Kb RNA1和3.3Kb RNA2构建到植物表达载体pXT1中，获得以农杆菌介导的对寄主植物有高效侵染能力的病毒载体pSqMV‑RNA1和pSqMV‑RNA2。本发明为研究该病毒各基因组、各基因的结构与功能及其与寄主之间的互作奠定了基础，也为揭示该病毒种传机制提供了新的方法。
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公开(公告)号：CN105296526B
公开(公告)日：2018-10-12
申请号：CN201510554148.4
申请日：2015-09-02
申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所
IPC分类号： C12N15/82 , C12N1/21 , G01N33/569 , C12Q1/70 , C12Q1/6895
摘要： 一种甜瓜坏死斑点病毒侵染性克隆载体，它是由甜瓜坏死斑点病毒全基因组与带35S启动子和核酶Rz的植物表达载体pCB301‑2x35S‑MCS‑HDVRZ‑NOS重组获得pCB301‑MNSV。通过冻融法将此载体转入农杆菌GV3101感受态细胞，然后通过农杆菌注射法接种甜瓜幼苗检测pCB301‑MNSV的侵染性。采用本发明的侵染性克隆载体在农杆菌中大量表达，能侵染甜瓜，西瓜和黄瓜等葫芦科作物，不侵染烟草，不感染动物和人类，相对安全，侵染性克隆的成功使对该病毒的研究易于在DNA水平上进行操作。
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公开(公告)号：CN117088955A
公开(公告)日：2023-11-21
申请号：CN202311240751.6
申请日：2023-09-25
申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所
IPC分类号： C07K14/415 , C12N15/29 , C12N15/84 , A01H5/00 , A01H6/34
摘要： 本发明公开了ClPR1蛋白在提高葫芦科植物抗病毒病方面的应用，属于基因工程领域。本发明通过在葫芦科植物如甜瓜、西瓜中过表达ClPR1蛋白，发现可以显著降低甜瓜、西瓜等葫芦科植物中病毒含量，说明ClPR1蛋白可以提高寄主植物的抗病毒病的能力。因此，ClPR1蛋白及其编码基因可用于农业和生态环境治理所需的抗病毒病植物品种的培育与鉴定，在植物抗病育种领域中具有重要作用。
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公开(公告)号：CN114107371A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111482446.9
申请日：2021-12-06
申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所
IPC分类号： C12N15/82 , C12N15/113 , A01H5/00 , A01H6/82
摘要： 本发明公开CGMMV基因介导转基因烟草方法。针对现有技术不能利用重组质粒构建含CGMMV来源基因片段的具有发卡结构的ihpRNAi植物表达载体并能成功获得抗性烟草的方法的缺陷，本发明首先提供重组质粒pHellsgate2‑N及其构建方法。该重组载体是将CGMMV基因片段与干涉载体pHellsgate2进行重组反应构建获得。本发明还由该重组质粒转化得到的烟草干涉表达ihpRNAi载体及其构建方法。发明还提供CGMMV Helicase基因、完整外壳基因在病毒基因介导抗性烟草培育中的应用，以及经筛选得到的目的片段He1、He2、He3。
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