公开(公告)号：CN114958898B

公开(公告)日：2023-11-14

申请号：CN202210548808.8

申请日：2022-05-20

申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所

发明人： 吴会杰 ,  郭婷婷 ,  杨士兵 ,  肖峰 ,  康保珊 ,  洪霓 ,  彭斌 ,  刘莉铭 ,  古勤生

IPC分类号： C12N15/80 ,  C12N15/65 ,  C12N1/15 ,  C12R1/645

摘要： 本发明属于微生物领域，涉及菜豆壳球孢的遗传转化，特别是指PEG介导的菜豆壳球孢遗传转化体系的建立方法及其应用。将活化好的菜豆壳球孢菌丝，经研磨再振荡培养后，用三层滤纸过滤收集沉淀，沉淀经KCl溶液洗涤后，转移至裂解液中经摇床培养获得原生质体；向原生质体悬浮液中加入目的质粒，再逐滴加入40%SPTC溶液，再加入TB3培养液，制备恢复好的菌丝；将菌丝转入含有筛选抗生素的PDA培养基中，进行平板筛选培养，获得转化子；利用PEG介导将gfp基因转化至菜豆壳球孢中，转化子经5代转接后，仍能检测到目的gfp基因。转化后的菌株接种甜瓜后表现出与原始菌株一致的致病性，表明成功构建了菜豆壳球孢的遗传转化体系。

公开(公告)号：CN114958898A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210548808.8

申请日：2022-05-20

申请人： 中国农业科学院郑州果树研究所

发明人： 吴会杰 ,  郭婷婷 ,  杨士兵 ,  肖峰 ,  康保珊 ,  洪霓 ,  彭斌 ,  刘莉铭 ,  古勤生

IPC分类号： C12N15/80 ,  C12N15/65 ,  C12N1/15 ,  C12R1/645

摘要： 本发明属于微生物领域，涉及菜豆壳球孢的遗传转化，特别是指PEG介导的菜豆壳球孢遗传转化体系的建立方法及其应用。将活化好的菜豆壳球孢菌丝，经研磨再振荡培养后，用三层滤纸过滤收集沉淀，沉淀经KCl溶液洗涤后，转移至裂解液中经摇床培养获得原生质体；向原生质体悬浮液中加入目的质粒，再逐滴加入40%SPTC溶液，再加入TB3培养液，制备恢复好的菌丝；将菌丝转入含有筛选抗生素的PDA培养基中，进行平板筛选培养，获得转化子；利用PEG介导将gfp基因转化至菜豆壳球孢中，转化子经5代转接后，仍能检测到目的gfp基因。转化后的菌株接种甜瓜后表现出与原始菌株一致的致病性，表明成功构建了菜豆壳球孢的遗传转化体系。