公开(公告)号：CN107449915A

公开(公告)日：2017-12-08

申请号：CN201710579444.9

申请日：2017-07-17

申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所

发明人： 刘龙丁 ,  郑惠文 ,  孙明 ,  王晶晶 ,  郭磊 ,  李冰香 ,  龙海亭 ,  李洪哲 ,  范海涛 ,  杨泽宁 ,  储曼曼 ,  黄星

IPC分类号： G01N33/68

CPC分类号： G01N33/68

摘要： 本发明公开了一种检测血清中抗EV-D68病毒抗体的方法。提取EV-D68病毒基因组RNA，通过反转录和PCR扩增反应得到VP1基因的cDNA，将其克隆到克隆载体，再将转入表达载体得到重组表达质粒，转化宿主菌并用IPTG诱导蛋白表达，表达产物通过包涵体的提取、变性、复性、纯化得到可以作为鉴别诊断抗原的VP1融合蛋白。将抗原包被96孔酶标板，用间接Elisa方法检测已用EV-D68灭活病毒抗原及佐剂制备的EV-D68灭活疫苗免疫后的新西兰大白兔、恒河猴、小鼠的血清，来确定大肠杆菌表达的VP1融合蛋白作为检测抗原的敏感性和特异性。本发明确定了与EV-D68VP1蛋白相结合的抗体的亲和力，具有操作简单，特异性高、灵敏度高、耗时短、成本低的特点。