一种检测血清中抗EV-D68病毒抗体的方法

    公开(公告)号:CN107449915A

    公开(公告)日:2017-12-08

    申请号:CN201710579444.9

    申请日:2017-07-17

    IPC分类号: G01N33/68

    CPC分类号: G01N33/68

    摘要: 本发明公开了一种检测血清中抗EV-D68病毒抗体的方法。提取EV-D68病毒基因组RNA,通过反转录和PCR扩增反应得到VP1基因的cDNA,将其克隆到克隆载体,再将转入表达载体得到重组表达质粒,转化宿主菌并用IPTG诱导蛋白表达,表达产物通过包涵体的提取、变性、复性、纯化得到可以作为鉴别诊断抗原的VP1融合蛋白。将抗原包被96孔酶标板,用间接Elisa方法检测已用EV-D68灭活病毒抗原及佐剂制备的EV-D68灭活疫苗免疫后的新西兰大白兔、恒河猴、小鼠的血清,来确定大肠杆菌表达的VP1融合蛋白作为检测抗原的敏感性和特异性。本发明确定了与EV-D68VP1蛋白相结合的抗体的亲和力,具有操作简单,特异性高、灵敏度高、耗时短、成本低的特点。