公开(公告)号：CN102305823A

公开(公告)日：2012-01-04

申请号：CN201110137040.7

申请日：2011-05-25

申请人： 中国检验检疫科学研究院

发明人： 韩辉 ,  李海山 ,  陈春霞 ,  胡群 ,  徐宝梁 ,  姚李四 ,  杨宇 ,  王艳 ,  李新 ,  张晓龙

IPC分类号： G01N27/447

摘要： 本发明提供一种甲型副伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳方法，以经分离得到的甲型副伤寒沙门菌为分析样品，依次进行以下各步骤：胶块制备、细胞裂解、洗胶块、胶块内DNA的酶切、加样和电泳；其中，所述的胶块制备、细胞裂解、洗胶块和加样步骤都按照常规脉冲场凝胶电泳方法进行；所述的胶块内DNA的酶切是以Spe I作为首选酶，Xba I作为次选酶，Xho I作为第三种酶；所述的电泳参数中，Spe I酶对应的脉冲时间为1-20s，19-20h；Xba I酶对应的脉冲时间为1.5-29s，19-20h；Xho I酶对应的脉冲时间为2.2-29s，19-20h。本发明的方法对甲型副伤寒沙门菌的分辨率相对现有技术显著提高，能够有效的应用于甲型副伤寒沙门菌的分子分型或基因组变异的检测。

公开(公告)号：CN102305823B

公开(公告)日：2014-07-30

申请号：CN201110137040.7

申请日：2011-05-25

申请人： 中国检验检疫科学研究院

发明人： 韩辉 ,  李海山 ,  马爱敏 ,  胡群 ,  徐宝梁 ,  姚李四 ,  杨宇 ,  李新 ,  左锋 ,  钟响

IPC分类号： G01N27/447

摘要： 本发明提供一种甲型副伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳方法，以经分离得到的甲型副伤寒沙门菌为分析样品，依次进行以下各步骤：胶块制备、细胞裂解、洗胶块、胶块内DNA的酶切、加样和电泳；其中，所述的胶块制备、细胞裂解、洗胶块和加样步骤都按照常规脉冲场凝胶电泳方法进行；所述的胶块内DNA的酶切是以Spe I作为首选酶，Xba I作为次选酶，Xho I作为第三种酶；所述的电泳参数中，Spe I酶对应的脉冲时间为1-20s，19-20h；Xba I酶对应的脉冲时间为1.5-29s，19-20h；Xho I酶对应的脉冲时间为2.2-29s，19-20h。本发明的方法对甲型副伤寒沙门菌的分辨率相对现有技术显著提高，能够有效的应用于甲型副伤寒沙门菌的分子分型或基因组变异的检测。

公开(公告)号：CN102827925A

公开(公告)日：2012-12-19

申请号：CN201210122760.0

申请日：2012-04-24

申请人： 中国检验检疫科学研究院

发明人： 韩辉 ,  徐宝梁 ,  李海山 ,  胡群 ,  刘丰 ,  周蕾

IPC分类号： C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/63

摘要： 本发明公开了一种TaqMan探针荧光RT-PCR检测创伤弧菌的非诊断性方法，以创伤弧菌溶血素vvhA基因的DNA序列作为靶序列，比对后选取保守区域，确定vvhA基因的保守序列，设计创伤弧菌实时PCR引物和探针，创伤弧菌实时PCR检测方法利用特异性荧光探针，实行完全闭管式操作，大大减少了扩增产物污染的机会、减少了实验步骤、实验时间和对试剂的消耗，不同于常规PCR，无需电泳鉴定，不易污染环境出现假阳性结果，该方法能快速地检测到致病菌，具有很高的灵敏度、特异度和检测下限，可以用于国境口岸环境水体、水产品以及腹泻病人粪便中创伤弧菌的检测，有很高的应用价值。