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公开(公告)号：CN102943091A
公开(公告)日：2013-02-27
申请号：CN201210440489.5
申请日：2012-11-07
Applicant: 中国烟草总公司郑州烟草研究院
Abstract: 一种利用RNAi技术培育抗多种病毒烟草的方法，通过对GenBank中4种病毒（CMV、PVY、PVX、TMV）的多条基因组全长序列进行比对，筛选到4种病毒在基因组范围内的相对保守区域；最终选定各病毒序列，人工合成800bp的嵌合基因；依此构建了嵌合基因的RNAi植物表达载体，通过农杆菌转化普通烟草，获得转基因植株。本发明的特点是：以我国四种主要烟草病毒为对象，利用植物基因工程技术将人为构建的包含四种病毒序列的发夹状结构转入烟草中，使烟草转录出的发夹状双链RNA结构在植物自身机制下剪切成小RNA（siRNA），特异性地干扰、降解或沉默靶标病毒基因在烟草植株体内的正常复制和积累，筛选获得抗多种烟草病毒的烟草新材料。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102943091B
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201210440489.5
申请日：2012-11-07
Applicant: 中国烟草总公司郑州烟草研究院
Abstract: 一种利用RNAi技术培育抗多种病毒烟草的方法，通过对GenBank中4种病毒（CMV、PVY、PVX、TMV）的多条基因组全长序列进行比对，筛选到4种病毒在基因组范围内的相对保守区域；最终选定各病毒序列，人工合成800bp的嵌合基因；依此构建了嵌合基因的RNAi植物表达载体，通过农杆菌转化普通烟草，获得转基因植株。本发明的特点是：以我国四种主要烟草病毒为对象，利用植物基因工程技术将人为构建的包含四种病毒序列的发夹状结构转入烟草中，使烟草转录出的发夹状双链RNA结构在植物自身机制下剪切成小RNA（siRNA），特异性地干扰、降解或沉默靶标病毒基因在烟草植株体内的正常复制和积累，筛选获得抗多种烟草病毒的烟草新材料。
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公开(公告)号：CN102140546B
公开(公告)日：2012-12-05
申请号：CN201110067006.7
申请日：2011-03-20
Applicant: 中国烟草总公司郑州烟草研究院
Abstract: 一步法复合检测烟草普通花叶病毒与马铃薯Y病毒的方法，其特征是：该方法包括甄别比对病毒基因组中保守区域，人工筛选合成适用于两种病毒病复合RT-PCR特异性引物；分析获得TMV、PVY复合侵染烟叶样本，整合反转录和PCR反应所需酶和缓冲液，通过反应条件优化，建立基于一步法RT-PCR复合检测烟叶感染TMV、PVY的方法。其优点为：1、使TMV、PVY病原的检测更简便，减少了试验污染和反应中的影响因素，检测时间大大缩短。2、提供的TMV、PVY特异性引物，具有非常高的病毒病原特异性，能够有效单一或复合识别TMV、PVY，保证检测结果的准确性。3、使用起来省时、省力，对样品材料要求不高、受实验条件的限制少。
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公开(公告)号：CN102140546A
公开(公告)日：2011-08-03
申请号：CN201110067006.7
申请日：2011-03-20
Applicant: 中国烟草总公司郑州烟草研究院
Abstract: 一步法复合检测烟草普通花叶病毒与马铃薯Y病毒的方法，其特征是：该方法包括甄别比对病毒基因组中保守区域，人工筛选合成适用于两种病毒病复合RT-PCR特异性引物；分析获得TMV、PVY复合侵染烟叶样本，整合反转录和PCR反应所需酶和缓冲液，通过反应条件优化，建立基于一步法RT-PCR复合检测烟叶感染TMV、PVY的方法。其优点为：1、使TMV、PVY病原的检测更简便，减少了试验污染和反应中的影响因素，检测时间大大缩短。2、提供的TMV、PVY特异性引物，具有非常高的病毒病原特异性，能够有效单一或复合识别TMV、PVY，保证检测结果的准确性。3、使用起来省时、省力，对样品材料要求不高、受实验条件的限制少。
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公开(公告)号：CN102242224B
公开(公告)日：2013-02-13
申请号：CN201110198507.9
申请日：2011-07-15
Applicant: 中国烟草总公司郑州烟草研究院
Abstract: 三重一步法RT-PCR同时检测烟草上三种病毒的方法，其特征在于：是同时检测烟草普通花叶病毒、马铃薯Y病毒和黄瓜花叶病毒的方法，该方法包括甄别比对病毒基因组中保守区域，人工筛选合成适用于三种病毒病复合RT-PCR特异性引物；分析获得TMV、PVY、CMV侵染烟叶样本；整合反转录和PCR反应所需酶和缓冲液，通过反应条件优化，建立基于一步法RT-PCR复合检测烟叶感染TMV、PVY、CMV的方法。本发明所采用的三重一步法RT-PCR反应，具有操作简便、省时省力、结果可靠、成本低廉的优点，同时可有效减少操作过程中造成样品交叉污染的可能性，对于烟草农业生产中TMV、PVY、CMV的监测监控具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN102242224A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201110198507.9
申请日：2011-07-15
Applicant: 中国烟草总公司郑州烟草研究院
Abstract: 三重一步法RT-PCR同时检测烟草上三种病毒的方法，其特征在于：是同时检测烟草普通花叶病毒、马铃薯Y病毒和黄瓜花叶病毒的方法，该方法包括甄别比对病毒基因组中保守区域，人工筛选合成适用于三种病毒病复合RT-PCR特异性引物；分析获得TMV、PVY、CMV侵染烟叶样本；整合反转录和PCR反应所需酶和缓冲液，通过反应条件优化，建立基于一步法RT-PCR复合检测烟叶感染TMV、PVY、CMV的方法。本发明所采用的三重一步法RT-PCR反应，具有操作简便、省时省力、结果可靠、成本低廉的优点，同时可有效减少操作过程中造成样品交叉污染的可能性，对于烟草农业生产中TMV、PVY、CMV的监测监控具有广泛的应用前景。
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