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公开(公告)号：CN105385687B
公开(公告)日：2018-06-15
申请号：CN201510989404.2
申请日：2015-12-24
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院 , 郑州大学
IPC分类号： C12N15/11 , C12N15/10 , C12Q1/6895
摘要： 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及烟草26S RNA（26Sribosomal RNA）内参基因的克隆方法及其应用。本发明所获得的26S RNA基因的部分核苷酸序列可作为研究烟草功能基因或不同组织、不同生长发育阶段以及不同激素处理条件下的基因表达分析的内参基因。利用该内参基因设计的实时荧光定量PCR引物扩增特异性强，能够提高烟草基因表达分析研究的稳定性、可靠性和重复性。
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公开(公告)号：CN103805576B
公开(公告)日：2017-04-19
申请号：CN201410062817.1
申请日：2014-02-24
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 本发明公开了一种烟草鲨烯环氧酶蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。烟草鲨烯环氧酶基因NtSE是烟草甾醇合成途径的关键调控基因。在幼嫩组织中特异高表达，将构建好的病毒介导的基因沉默载体TRV‑NtSE接种本氏烟草，并得到高沉默效率的植株，检测本氏烟草中植物甾醇的含量，发现基因沉默植株中甾醇含量显著下降，下降了21.37%，表明沉默该基因可以显著的降低植物的甾醇含量。烟草鲨烯环氧酶基因NtSE是烟草甾醇合成途径的关键调控基因，可用于调节烟草的甾醇含量，有助于低甾醇优质烟草的基因工程育种。
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公开(公告)号：CN103919263B
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201410140978.8
申请日：2014-04-10
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 一种利用共晶点、共熔点判断烟叶样品冷冻干燥预冷温度的方法，其特征在于：是以冻干机为平台，通过差式扫描热量法（DSC）对不同时期的新鲜烟叶样品共晶点和共熔点进行测定，确定新鲜烟叶样品冷冻干燥合适的一次干燥温度和二次干燥温度。本发明的突出优点在于：围绕新鲜烟叶的真空冷冻干燥工艺，确定出节能高效的冷冻温度，为大批新鲜烟叶样品的冷冻干燥提供合适的工艺，从而达到节能高效的目的。
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公开(公告)号：CN105352925A
公开(公告)日：2016-02-24
申请号：CN201510699659.5
申请日：2015-10-26
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： G01N21/64
CPC分类号： G01N21/643 , G01N2021/6432
摘要： 一种基于纳米蔟的铜离子检测方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1）将标准铜离子溶液和金纳米簇进行混合，建立检测纳米簇的荧光信号淬灭和铜离子量之间的标准曲线；2）将样品溶液和金纳米簇进行混合，将检测纳米簇的荧光信号淬灭强度带入标准曲线，得到样品中铜离子的含量。所述金纳米簇的浓度为0.5 mM，PH值为7；金纳米簇是由GSH包裹修饰的。实验证明，该检测方法的灵敏度高，其他离子对铜离子检测干扰小，本发明可实现对铜离子的选择性检测，从而达到快速检测铜离子浓度的目的，在铜离子的检测中具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN103954710B
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201410221024.X
申请日：2014-05-23
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： G01N30/06
摘要： 一种LC-MS/MS检测烟草及烟草制品中特有亚硝胺的样品前处理方法，步骤如下：1）配制乙酸铵缓冲溶液；2）烟草及烟草制品的干燥、粉碎；3）粉碎好的样品加入乙酸铵缓冲溶液，超声提取；4）提取完的样品室温高速离心，得第一上清液；5）在第一上清液中加入乙酸乙酯进行萃取净化后，离心得第二上清液；6）取第二上清液经氮气吹干、去离子水复溶，制得待测样品；7）通过LC-MS/MS对待测样品中含有的烟草特有亚硝胺进行检测。本发明的优点在于：样品前处理方法简单易行，利用乙酸铵缓冲溶液将烟草特有亚硝胺溶出，并通过乙酸乙酯液液萃取进行净化，除去了蛋白质和干扰物质，得到除杂后的精制样液，使得样品检测具有较高精确度，且提取效率高，操作简便、省时，试剂消耗量小。
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公开(公告)号：CN104297380B
公开(公告)日：2015-12-30
申请号：CN201410613329.5
申请日：2014-11-05
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： G01N30/02
摘要： 本发明提供一种LC-MS/MS检测新鲜烟叶中IPP、GPP、FPP和GGPP的方法，包括以下步骤：1）配制提取溶剂；2）新鲜烟叶液氮速冻，冷冻干燥并打碎；3）粉碎好的样品加入提取溶剂，低温超声提取；4）冷冻离心，取上清液并过滤；5）LC-MS/MS对待测样品中IPP、GPP、FPP和GGPP进行检测。其优点在于：样品前处理方法简单，只需超声并过滤，与现有的方法相比，该方法灵敏度高，精密度好，加标回收率高，样品经过滤可直接进样分析，而现有文献中所述方法前处理繁琐费时，需要焦磷酸酶和碱性磷酸酶对样品进行生化反应处理。因此，本发明能有效地提高分析效率，适合复杂基质中超低含量目标物的分析。
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公开(公告)号：CN104782581A
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201510205371.8
申请日：2015-04-28
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： A01K67/033 , A01M1/04 , A01M1/10 , A01M1/06
摘要： 本发明公开了一种叠加式蚜虫饲养和转移装置进行转移、收集蚜虫的方法，包括上下相邻设置的两个结构相同的矩形箱体，矩形箱体顶板为透明面板，矩形箱体的四个侧板设有纱网，矩形箱体的底板上方设置有固定隔栏；透明面板和底板均与矩形箱体滑动连接，两个矩形箱体接触面设置有密封装置且两个矩形箱体通过卡接装置连接；两个矩形箱体的一个侧板纱网上均连接有连通装置的一端，连通装置的另一端与蚜虫收集装置连接；蚜虫收集装置的一侧设置有昆虫诱集灯。本发明能够在饲养过程中简单方便地收集蚜虫，既提高了蚜虫收集效率，避免对蚜虫虫体的伤害，叠加式设计能够节省占地面积，在更换活体植物时有效防止蚜虫逃逸，保障生态安全。
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公开(公告)号：CN104782580A
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201510205331.3
申请日：2015-04-28
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： A01K67/033
摘要： 本发明公开了一种并行式蚜虫饲养和转移装置和转移装置进行转移、收集蚜虫的方法，包括前后相邻设置的两个结构相同的矩形箱体，每个矩形箱体的顶板均为透明面板，每个矩形箱体的四个侧板均设置有纱网，两个矩形箱体相邻的两个侧板均为滑动侧板，滑动侧板与箱体滑动连接；两个矩形箱体接触面设置有密封装置且两个矩形箱体通过卡接装置连接；两个矩形箱体除相邻的滑动侧板外的一个侧板纱网上均连接有连通装置的一端，连通装置的另一端与蚜虫收集装置连接；蚜虫收集装置的一侧设置有昆虫诱集灯。本发明能够在饲养过程中简单方便地收集蚜虫，既提高了蚜虫收集效率，避免对蚜虫虫体的伤害，还能够在更换活体植物时有效防止蚜虫逃逸，保障了生态安全。
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公开(公告)号：CN104630209A
公开(公告)日：2015-05-20
申请号：CN201510114907.5
申请日：2015-03-17
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： C12N15/10
摘要： 一种无损伤冷抽提小型昆虫基因组DNA的方法，包括以下几个步骤：1）配制基因组DNA提取缓冲液；2）用95%酒精小心清洗昆虫体表的杂质，再用蒸馏水清洗；3）将昆虫放入离心管内，加入3～6倍虫体体积的提取缓冲液，50±5℃水浴； 4）-20℃放置14～17 h，冷抽提基因组DNA；5）加入蛋白酶K，使其终浓度为0.6 mg/mL，50±5℃水浴；6）95℃水浴灭活蛋白酶K；7）将昆虫从离心管中取出，管内溶液即含有该昆虫的基因组DNA。该提取方法不仅能够保持虫体的完整性，而且经过-20℃冷抽提，使昆虫的基因组DNA在低温条件下从虫体内充分释放，避免了基因组DNA的降解，提高了基因组DNA的质量。
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公开(公告)号：CN104152475A
公开(公告)日：2014-11-19
申请号：CN201410405714.0
申请日：2014-08-18
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 本发明公开了一种烟草ε-番茄红素环化酶基因，其碱基序列如SEQIDNO：1所示。本发明通过同源克隆的方式，从栽培烟草红花大金元体内克隆获得Ntε-LCY基因序列，并且进行了表达模式及亚细胞定位分析。利用烟草脆裂病毒（Tobaccorattlevirus，TRV）诱导基因沉默注射本氏烟草，结果表明ε-LCY的部分沉默可以提高烟叶中类胡萝卜素含量，并且增强烟株抵御光抑制的能力。该研究结果能够为利用基因工程技术培育优良品种提供理论依据和基因资源。
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