公开(公告)号：CN107418960A

公开(公告)日：2017-12-01

申请号：CN201610348589.3

申请日：2016-05-24

申请人： 中国科学院大连化学物理研究所

发明人： 尹恒 ,  王江 ,  曾海红 ,  马君燕 ,  张鑫 ,  吴树丽

IPC分类号： C12N15/53 ,  C12N9/04 ,  C12P7/62 ,  C12R1/01

CPC分类号： C12N9/0006 ,  C12P7/625 ,  C12Y101/01036

摘要： 本发明公开了一种来源于甲基杆菌属(Methylobacterium sp.在中国北纳菌种保藏中心的资源编号为：BNCC195932)的乙酰乙酰辅酶A还原酶(PhaB)的基因序列及其制备方法和应用，即设计引物从该菌中扩增出该基因的核酸序列，再将该酶的基因克隆到大肠杆菌表达载体上，获得可异源表达该酶的大肠杆菌重组菌株，用该菌株异源表达制备的乙酰乙酰辅酶A还原酶，可以用于合成聚羟基脂肪酸酯(PHA)和羟脂肪酸。

公开(公告)号：CN106554951B

公开(公告)日：2020-05-26

申请号：CN201510631920.8

申请日：2015-09-29

申请人： 中国科学院大连化学物理研究所

发明人： 尹恒 ,  马君燕 ,  曹海龙 ,  谭海东 ,  王文霞

IPC分类号： C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P19/14

摘要： 本发明提供了一种重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶。本发明还提供了一种制备该重组外切菊粉酶的高效分泌表达方法，属于基因工程领域。该方法主要包括以下步骤：根据Swiss‑Model建模结果，确定外源分离纯化标签引入鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶的位置，即在远离该外切菊粉酶催化活性中心的N端引入编码6个组氨酸的分离纯化标签序列，将重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶基因克隆到毕赤酵母的表达载体pPICZαA，并将重组质粒经电转化法整合到毕赤酵母宿主菌X‑33中，即可获得能高效分泌表达便于分离纯化、高活性的可降解菊粉产生高纯度果糖浆的重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶。本发明制备的外切菊粉酶可广泛应用于食品、药品、生物能源等领域。

公开(公告)号：CN106554951A

公开(公告)日：2017-04-05

申请号：CN201510631920.8

申请日：2015-09-29

申请人： 中国科学院大连化学物理研究所

发明人： 尹恒 ,  马君燕 ,  曹海龙 ,  谭海东 ,  王文霞

IPC分类号： C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P19/14

摘要： 本发明提供了一种重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶。本发明还提供了一种制备该重组外切菊粉酶的高效分泌表达方法，属于基因工程领域。该方法主要包括以下步骤：根据Swiss-Model建模结果，确定外源分离纯化标签引入鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶的位置，即在远离该外切菊粉酶催化活性中心的N端引入编码6个组氨酸的分离纯化标签序列，将重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶基因克隆到毕赤酵母的表达载体pPICZαA，并将重组质粒经电转化法整合到毕赤酵母宿主菌X-33中，即可获得能高效分泌表达便于分离纯化、高活性的可降解菊粉产生高纯度果糖浆的重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶。本发明制备的外切菊粉酶可广泛应用于食品、药品、生物能源等领域。