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公开(公告)号：CN118581056A
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202410852017.3
申请日：2024-06-28
申请人： 中国科学院天津工业生物技术研究所 , 天工生物科技(天津)有限公司
摘要： 本发明属于酶基因工程技术领域，具体涉及一种热稳定性提高的异柠檬酸脱氢酶及其基因和应用。本发明通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ICDH序列进行R180I突变，得到了突变体ICDH‑M2。其在4℃条件下保存24‑72h时，其残留酶活是野生型酶的2.2‑16.4倍，并且随着保存时间的延长本发明的突变酶的残余酶活与野生型酶相比下降更加缓慢。本发明扩大了异柠檬酸脱氢酶基因的资源，也为异柠檬酸代谢过程中异柠檬酸的转化提供了优良的异柠檬酸脱氢酶。
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公开(公告)号：CN118581057A
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202410852566.0
申请日：2024-06-28
申请人： 中国科学院天津工业生物技术研究所 , 天工生物科技(天津)有限公司
摘要： 本发明属于酶基因工程技术领域，具体涉及一种热稳定性提高的异柠檬酸脱氢酶突变体及其应用。本发明通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ICDH序列进行C301T突变，得到了突变体ICDH‑M3。其在4℃条件下保存24‑72h时，其残留酶活是野生型酶的2.4‑27.1倍，并且随着保存时间的延长本发明的突变酶的残余酶活与野生型酶相比下降更加缓慢。本发明扩大了异柠檬酸脱氢酶基因的资源，也为异柠檬酸代谢过程中异柠檬酸的转化提供了优良的异柠檬酸脱氢酶。
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公开(公告)号：CN118599795A
公开(公告)日：2024-09-06
申请号：CN202410852325.6
申请日：2024-06-28
申请人： 中国科学院天津工业生物技术研究所 , 天工生物科技(天津)有限公司
摘要： 本发明属于酶基因工程技术领域，具体涉及一种热稳定性提高的异柠檬酸脱氢酶及其基因和应用。本发明通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ICDH序列进行A98L突变，得到了突变体ICDH‑M1。其在4℃条件下保存24‑72h时，其残留酶活是野生型酶的1.7‑14.8倍，并且随着保存时间的延长本发明的突变酶的残余酶活与野生型酶相比下降更加缓慢。本发明扩大了异柠檬酸脱氢酶基因的资源，也为异柠檬酸代谢过程中异柠檬酸的转化提供了优良的异柠檬酸脱氢酶。
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公开(公告)号：CN115725688B
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202110990958.X
申请日：2021-08-26
申请人： 中国科学院天津工业生物技术研究所
IPC分类号： C12Q1/10 , C12Q1/04 , C12Q1/6897 , C12R1/19 , C12R1/01
摘要： 本发明公开一种高通量检测筛选生产次级代谢产物放线菌株的方法，其利用生物传感器的共培养液滴高通量筛选，可以高通量的在不同次级代谢产物产量的放线菌混库中筛选出产量高的个体，且无需对放线菌进行基因工程改造，避免了某些放线菌遗传改造的困难或引发的基因组不稳定性，有利于对于工业菌株的筛选。且筛选通量可以达到10万个菌株/天，相比较于常用的孔板和摇瓶几百个/天的速度，本发明的检测和筛选通量提高了近千倍，因此具有很高的应用价值。
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公开(公告)号：CN117512028A
公开(公告)日：2024-02-06
申请号：CN202311511664.X
申请日：2023-11-14
申请人： 中国科学院天津工业生物技术研究所
摘要： 本发明公开了大伏革菌来源的PgEgt1基因及其编码蛋白在麦角硫因合成中的应用。本发明提供了由PgEgt1蛋白(SEQ ID No.1)和PpEgt2蛋白(SEQ ID No.2)组成的成套蛋白在制备麦角硫因中的应用。本发明利用来源于大伏革菌的麦角硫因合成酶PgEgt1和来源于肺形侧耳的PpEgt2在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达，构建了麦角硫因异源合成工程菌株。本发明有助于进一步丰富麦角硫因生物合成元件，为后续通过代谢工程和合成生物学手段构建高产工程菌种奠定基础。
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公开(公告)号：CN117512027A
公开(公告)日：2024-02-06
申请号：CN202311511662.0
申请日：2023-11-14
申请人： 中国科学院天津工业生物技术研究所
摘要： 本发明公开了裂褶菌来源的ScEgt1基因及其编码蛋白在麦角硫因合成中的应用。本发明提供了由ScEgt1蛋白(SEQ ID No.1)和PoEgt2蛋白(SEQ ID No.2)组成的成套蛋白在制备麦角硫因中的应用。本发明利用来源于裂褶菌的麦角硫因合成酶ScEgt1和来源于糙皮侧耳的PoEgt2在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达，构建了麦角硫因异源合成工程菌株。本发明有助于进一步丰富麦角硫因生物合成元件，为后续通过代谢工程和合成生物学手段构建高产工程菌种奠定基础。
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公开(公告)号：CN112852915A
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN201911188262.4
申请日：2019-11-28
申请人： 中国科学院天津工业生物技术研究所
摘要： 本发明公开了一种使用液滴微流控芯片的高通量筛选方法在放线菌中的应用，通过本方法可以将放线菌单孢子被包埋到单液滴中，在液滴中0‑7d的培养时间内间稳定成型保证了宽泛的检测及分选时间，在检测方面，用此方法可以高通量检测到在放线菌中有功能的启动子，或鉴定一些未知启动子的强度，并筛选到适宜强度的启动子元件用于后续的放线菌菌株改造；在筛选方面，此方法的筛选通量可以达到105个菌株/天，可以对产生绿色荧光信号的阳性菌和不产生绿色荧光信号的阴性菌的混库进行成功分选，其中分选后的阳性菌富集率达到81.7％以上，相较分选前的3.1％提高至26倍。
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公开(公告)号：CN112852915B
公开(公告)日：2024-04-09
申请号：CN201911188262.4
申请日：2019-11-28
申请人： 中国科学院天津工业生物技术研究所
摘要： 本发明公开了一种使用液滴微流控芯片的高通量筛选方法在放线菌中的应用，通过本方法可以将放线菌单孢子被包埋到单液滴中，在液滴中0‑7d的培养时间内间稳定成型保证了宽泛的检测及分选时间，在检测方面，用此方法可以高通量检测到在放线菌中有功能的启动子，或鉴定一些未知启动子的强度，并筛选到适宜强度的启动子元件用于后续的放线菌菌株改造；在筛选方面，此方法的筛选通量可以达到105个菌株/天，可以对产生绿色荧光信号的阳性菌和不产生绿色荧光信号的阴性菌的混库进行成功分选，其中分选后的阳性菌富集率达到81.7％以上，相较分选前的3.1％提高至26倍。
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公开(公告)号：CN109722401B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN201711027820.X
申请日：2017-10-28
申请人： 中国科学院天津工业生物技术研究所
摘要： 本发明涉及一种构建重组谷氨酸棒杆菌生产新型靛蓝染料的方法，属于生物工程领域。通过将靛蓝合成酶基因(bpsA)及4’‑磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因(sfp)克隆重组，共表达至谷氨酸棒杆菌中，构建重组谷氨酸棒杆菌C.glutamicum ATCC 13032‑(BpsA‑SFP)，该重组谷氨酸棒杆菌能以L‑谷氨酰胺为底物合成靛蓝染料。摇瓶发酵培养LBG液体培养基中，温度为30℃，发酵培养至菌体生长OD600达到0.6‑0.8时，加入0.8mM IPTG及L‑谷氨酰胺11.68g/L，18℃，继续培养48h，靛蓝色素indigoidine产量最高，达到1.75g/L。本发明采用生物工程的策略，构建的重组谷氨酸棒杆菌来合成目的产物靛蓝色素indigoidine，为生物法高产indigoidine提供了新的思路。
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公开(公告)号：CN114381417B
公开(公告)日：2022-06-24
申请号：CN202210296227.X
申请日：2022-03-24
申请人： 中国科学院天津工业生物技术研究所
摘要： 本发明公开了一种提高谷氨酸棒杆菌对抑制物耐受性的方法，其通过降低或消除谷氨酸棒杆菌的内源甲酰四氢叶酸脱甲酰酶催化活力，或者突变谷氨酸棒杆菌内源D‑3‑磷酸甘油酸盐脱氢酶以增强其活性，或者将上述两种方法组合，以获得对抑制物的耐受性提高的重组谷氨酸棒杆菌。本发明构建的菌株为后续高性能工业发酵底盘菌株构建提供参考，有利于谷氨酸棒杆菌以木质纤维素水解液为原料生产生物燃料或其他高附加值化学品。
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