公开(公告)号：CN115807058A

公开(公告)日：2023-03-17

申请号：CN202211540393.6

申请日：2022-12-02

申请人： 中国科学院水生生物研究所

发明人： 汪洋 ,  韩笑 ,  李志 ,  周莉 ,  桂建芳

IPC分类号： C12Q1/6806 ,  C12N5/076 ,  C12N5/073

摘要： 本发明属于生殖遗传领域，涉及一种低偏向的单精子全基因组扩增方法。具体公开了一种低偏向的单精子全基因组扩增方法，本申请利用异种杂交配子发育初期的细胞卵裂快速同步复制DNA的特性，同时通过监控其中细胞周期的进程选取分裂末期的胚胎，最后结合其他常规体外全基因组扩增方法，完成完整高效的低偏向的单精子基因组扩增。与传统方法相比，该方法获得的扩增产物具有高全基因组覆盖度（>92%），极高的一致性和可靠性，这也使得对复杂物种的单精子分析成为可能。

公开(公告)号：CN112375757B

公开(公告)日：2022-04-01

申请号：CN202011237170.3

申请日：2020-11-09

申请人： 中国科学院水生生物研究所

发明人： 李志 ,  李熙银 ,  汪洋 ,  王忠卫 ,  周莉 ,  王焘 ,  韩笑 ,  俞兆曦 ,  连总强 ,  桂建芳

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/89 ,  C12N5/10

摘要： 本发明属于鱼类遗传育种领域，具体公开了一种高效创制黄河鲶mstn基因突变体的方法。本方法针对黄河鲶Myostatin‑肌肉生长抑制素基因设计靶位点，合成gRNA，与Cas9蛋白共同显微注射到黄河鲶成熟卵子（Ⅴ期卵）中，然后用黄颡鱼精子进行干法授精，孵化出苗后经突变效率检测，敲除效率为80%，平均突变效率为74.1%，且完全突变个体的比例为24%。该方法与传统鱼类基因编辑方法相比，在获得较高突变效率的同时，还能够高效获得黄河鲶完全突变个体，并且结合雌核生殖增加了突变个体的纯合度对于繁殖周期长的经济鱼类的快速定向分子设计育种也有重要参考价值。

公开(公告)号：CN115807058B

公开(公告)日：2023-06-30

申请号：CN202211540393.6

申请日：2022-12-02

申请人： 中国科学院水生生物研究所

发明人： 汪洋 ,  韩笑 ,  李志 ,  周莉 ,  桂建芳

IPC分类号： C12Q1/6806 ,  C12N5/076 ,  C12N5/073

摘要： 本发明属于生殖遗传领域，涉及一种低偏向的单精子全基因组扩增方法。具体公开了一种低偏向的单精子全基因组扩增方法，本申请利用异种杂交配子发育初期的细胞卵裂快速同步复制DNA的特性，同时通过监控其中细胞周期的进程选取分裂末期的胚胎，最后结合其他常规体外全基因组扩增方法，完成完整高效的低偏向的单精子基因组扩增。与传统方法相比，该方法获得的扩增产物具有高全基因组覆盖度（>92%），极高的一致性和可靠性，这也使得对复杂物种的单精子分析成为可能。

公开(公告)号：CN112375757A

公开(公告)日：2021-02-19

申请号：CN202011237170.3

申请日：2020-11-09

申请人： 中国科学院水生生物研究所

发明人： 李志 ,  李熙银 ,  汪洋 ,  王忠卫 ,  周莉 ,  王焘 ,  韩笑 ,  俞兆曦 ,  连总强 ,  桂建芳

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/89 ,  C12N5/10

摘要： 本发明属于鱼类遗传育种领域，具体公开了一种高效创制黄河鲶mstn基因突变体的方法。本方法针对黄河鲶Myostatin‑肌肉生长抑制素基因设计靶位点，合成gRNA，与Cas9蛋白共同显微注射到黄河鲶成熟卵子（Ⅴ期卵）中，然后用黄颡鱼精子进行干法授精，孵化出苗后经突变效率检测，敲除效率为80%，平均突变效率为74.1%，且完全突变个体的比例为24%。该方法与传统鱼类基因编辑方法相比，在获得较高突变效率的同时，还能够高效获得黄河鲶完全突变个体，并且结合雌核生殖增加了突变个体的纯合度对于繁殖周期长的经济鱼类的快速定向分子设计育种也有重要参考价值。