一种可以结合脂多糖的蛋白酶PCK及其制备和应用

    公开(公告)号:CN115181736A

    公开(公告)日:2022-10-14

    申请号:CN202210016038.2

    申请日:2022-01-07

    摘要: 本发明涉及分子生物学,具体地说是一种可以结合脂多糖的蛋白酶PCK及其制备和应用。蛋白酶其氨基酸序列中磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶激活位点、GTP结合位点、草酰乙酸作为底物的结合位点和金属结合位点。将含有PCK对应核苷酸的质粒转化到大肠杆菌中,随后进行诱导表达,采用Ni‑NTA亲和层析柱对PCK蛋白分离纯化;获得的PCK蛋白不仅具有催化草酰乙酸转变为磷酸烯醇式丙酮酸和二氧化碳的催化活性,亦可应用于脂多糖的清除或者中和。本发明利用原核表达和亲和层析的方法大量制备PCK蛋白酶,采用ELISA方法对脂多糖的结合活性进行鉴定,旨在降低药物清除LPS的毒副作用和成本,同时为蛋白酶在LPS清除剂上的应用提供新思路,为结合脂多糖的酶制剂的工业化推广奠定基础。

    一种对水产动物有免疫增强活性的CpG寡聚核苷酸及其制备和应用

    公开(公告)号:CN102399784A

    公开(公告)日:2012-04-04

    申请号:CN201010280221.0

    申请日:2010-09-10

    IPC分类号: C12N15/117 C12N15/10 A23K1/16

    摘要: 本发明涉及分子生物学,具体的说是一种对虾、蟹等水产养殖动物有免疫增强活性的CpG寡聚核苷酸及其制备和应用。具有免疫增强活性的CpG寡聚核苷酸具有序列表SEQ ID NO.1所示的碱基序列。将富含CpG寡聚核苷酸序列的质粒转化到大肠杆菌DH5α菌株中,随后进行发酵。收集发酵产物,采用异丙醇沉降法进行CpG ODNs的分离纯化。应用所述序列表SEQ IDNO.1所示的碱基序列CpG寡聚核苷酸可应用于水产养殖饲料添加剂或免疫增强剂,如每千克饲料中添加10-100mg上述CpG寡聚核苷酸可明显促进养殖动物的生长。本发明利用生物工程发酵的技术和简化的提取方法来大量扩增和提取CpG寡聚核苷酸,比实验室条件下更省时省力,效率也更高,便于工业化推广。

    一种原核重组表达的栉孔扇贝CfSRCR-2基因及其制备和应用

    公开(公告)号:CN103642816B

    公开(公告)日:2015-12-02

    申请号:CN201310655247.2

    申请日:2013-12-05

    摘要: 本发明属于基因工程领域,具体的说是一种原核重组表达的栉孔扇贝CfSRCR-2基因及其制备和应用。CfSRCR-2基因的重组蛋白为序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列所示。具体构建采用通过PCR技术扩增栉孔扇贝CfSRCR-2分子基因的cDNA全长,并对其编码区进行原核重组表达。本发明提供的栉孔扇贝CfSRCR-2基因含有SRCR结构域的活性分子。该蛋白不仅可以结合乙酰化的低密度脂蛋白和甘露糖,是一种重要的免疫受体分子,而且能够直接抑制革兰氏阴性菌的生长,从而起到免疫效应分子的作用,可见本发明蛋白可作为较好的免疫增强剂候选分子。