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公开(公告)号：CN101372509A
公开(公告)日：2009-02-25
申请号：CN200810214994.1
申请日：2008-09-01
申请人： 云南省农业科学院 , 云南烟草保山香料烟有限责任公司
摘要： 本发明提供一种新的重组中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow curlleaf China virus，TYCLCNV)香料烟分离物外壳蛋白基因AV1，构建该基因原核表达载体pET－28a－AV1；用重组TYCLCNV香料烟分离物外壳蛋白基因原核表达载体pET－28a－AV1转化大肠杆菌，用IPTG诱导表达重组TYCLCNV香料烟分离物外壳蛋白，回收并纯化所表达的重组蛋白；利用该重组外壳蛋白制备的抗血清建立酶联免疫吸附试验鉴别诊断方法，可以快速、准确的检测出香料烟中的中国番茄黄化曲叶病毒，填补了不能用ELISA快速、准确地检测鉴定香料烟曲叶病病原的空白。本发明所提供的用于香料烟曲叶病病原检测的原核表达的外壳蛋白及利用其制备的抗血清，可以得到大量的表达，适合大规模生产。
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公开(公告)号：CN112029907B
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202010918969.2
申请日：2020-09-04
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
摘要： 本发明公开了一种同步检测花毛茛中五种重要病毒病原的方法，所述的五种重要病毒病原为花毛茛轻花叶病毒、花毛茛隐症病毒、花毛茛白斑驳病毒、花毛茛花叶病毒和花毛茛叶片皱缩病毒。本发明应用通过提取植物总RNA或病毒RNA、随机引物合成不同种类病毒cDNA第一链、5种病毒特异引物多重复合PCR检测，省略了单一病毒引物逆转录合成cDNA第一链和病毒核苷酸序列测定与分析等步骤，利用多重PCR的快速和灵敏性获得目的片段，为大量、快速、准确、灵敏检测各类花毛茛病毒病样品建立了一种科学的方法。
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公开(公告)号：CN109929810A
公开(公告)日：2019-06-25
申请号：CN201910116016.1
申请日：2019-02-15
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
摘要： 本发明公开了一种马铃薯品种会-2中马铃薯卷叶病毒毒株及其构建方法与应用。所述的马铃薯品种会-2中马铃薯卷叶病毒毒株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日：2018年11月26日，保藏编号：CGMCC No.16892。马铃薯品种会-2中马铃薯卷叶病毒（Potato virus A，PVA）毒株建立包括样品采集；病原鉴定；会-2品种中单一马铃薯卷叶病毒组培苗建立以及应用。所述的样品采集包括病害调查、样品采集、保存；包括通过带毒薯块幼芽在培养基中诱导为组培苗、在一定温度条件下保存该带有PRLV会-2品种组培苗；应用为所述的马铃薯品种会-2中马铃薯卷叶病毒毒株在检测中的应用。
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公开(公告)号：CN109929809A
公开(公告)日：2019-06-25
申请号：CN201910116012.3
申请日：2019-02-15
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
摘要： 本发明公开了一种马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒毒株及其构建方法与应用。所述的马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒毒株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日：2018年11月26日，保藏编号：CGMCC No.16893。马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒（Potato virus S，PVS）毒株建立包括样品采集；病原鉴定；丽薯6号品种中单一马铃薯卷叶病毒组培苗建立以及应用。所述的样品采集包括病害调查、样品采集、保存；包括通过带毒薯块幼芽在培养基中诱导为组培苗、在一定温度条件下保存该带有PVS丽薯6号品种组培苗；应用为所述的马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒毒株在检测中的应用。
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公开(公告)号：CN103757138B
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201410034605.2
申请日：2014-01-25
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
摘要： 本发明公开了一种云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种病毒的检测方法。本发明通过对云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种特异性混合抗体诱捕病样中病毒，不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合，同时设置健康马铃薯随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照，从而快速、准确、灵敏的应用于检测田间马铃薯植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等方面。
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公开(公告)号：CN103760346A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201410034665.4
申请日：2014-01-25
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC分类号： G01N33/569 , G01N21/64
CPC分类号： G01N33/56983 , G01N33/582
摘要： 本发明公开了一种定量检测植物病毒的荧光免疫斑点法，是将待测样品研磨，制备检测样品上样液，配制阳性、阴性及空白对照上样液，测出阳性对照上样液的病毒粒体平均数d。将2.0~2.5μl检测样品上样液、阳性、阴性及空白对照上样液分别点在硝酸纤维素膜上，将膜干燥后封闭0.8~1.2h，依次加入稀释后的一抗、二抗，分别反应0.8~1.2h，每次反应后洗膜3~4次，每次5~6min。将膜稍干燥后置于荧光分光光度计中检测荧光强度m，按照下述公式计算检测样品上样液中待检测病毒的粒体平均数d。阳性对照上样液m值：阳性对照上样液d值=检测样品上样液m值：检测样品上样液d值。所述方法能够实现植物病毒的灵敏准确、快捷高效的定量分析，推广应用价值较高。
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公开(公告)号：CN103757138A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201410034605.2
申请日：2014-01-25
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
CPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6804 , C12Q2531/113 , C12Q2545/101
摘要： 本发明公开了一种云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种病毒的检测方法。本发明通过对云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种特异性混合抗体诱捕病样中病毒，不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合，同时设置健康马铃薯随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照，从而快速、准确、灵敏的应用于检测田间马铃薯植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等方面。
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公开(公告)号：CN1303424C
公开(公告)日：2007-03-07
申请号：CN200410033664.4
申请日：2004-04-15
IPC分类号： G01N33/531 , G01N1/34
摘要： 本发明涉及一种黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)云南分离物三抗体夹心酶联免疫吸附测定(TAS-ELISA)检测试剂盒及其制备方法，属于酶学或生物学装置领域。本发明试剂盒包含阳性对照、阴性对照、CMV多克隆抗体、CMV单克隆抗体、酶标抗体及其它材料和药品，其中，CMV多克隆抗体在分离提纯CMV云南分离物后，通过家兔免疫分离血清得到；CMV单克隆抗体在分离提纯CMV云南分离物后，通过小鼠免疫、细胞融合、克隆纯化得到。本发明制备的TAS-ELISA检测试剂盒试剂成本仅2元人民币/样次，最低检出浓度达到0.01ng/ml，在性价比上具有明显的市场竞争力。
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公开(公告)号：CN1303422C
公开(公告)日：2007-03-07
申请号：CN200410033666.3
申请日：2004-04-15
IPC分类号： G01N33/53 , G01N33/531 , G01N1/34
摘要： 本发明涉及一种马铃薯X病毒(Potato virus X，PVX)云南分离物三抗体夹心酶联免疫吸附测定(TAS-ELISA)检测试剂盒及其制备方法，属于酶学或生物学装置领域。本发明试剂盒包含阳性对照、阴性对照、PVX多克隆抗体、PVX单克隆抗体、酶标抗体及其它材料和药品，其中，PVX多克隆抗体在分离提纯PVX云南分离物后，通过家兔免疫分离血清得到；PVX单克隆抗体在分离提纯PVX云南分离物后，通过小鼠免疫、细胞融合、克隆纯化得到。本发明制备的TAS-ELISA检测试剂盒检测灵敏度达到0.01ng/ml，与电镜检测结果比较准确率相符，比间接ELISA和DAS-ELISA检测灵敏度提高100倍。
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公开(公告)号：CN1281959C
公开(公告)日：2006-10-25
申请号：CN200410033669.7
申请日：2004-04-15
IPC分类号： G01N33/547 , G01N33/531 , G01N1/28
摘要： 本发明公开了一种烟草花叶病毒云南分离物TAS-ELISA检测试剂盒，包括盒体、设在盒体内的酶标板和设在盒体内的用液，盒体内的用液包括阳性对照、阴性对照、酶标抗体、缓冲液和底物，盒体内的用液还包括烟草花叶病毒云南分离物的多克隆抗体、烟草花叶病毒云南分离物的单克隆抗体，所述的烟草花叶病毒云南分离物多克隆抗体和所述的烟草花叶病毒云南分离物单克隆抗体由20～30mg/ml病毒浓度的烟草花叶病毒提取液作为免疫抗原，分别采用免疫注射法、单克隆抗体法制备而成；本发明所述的检测试剂盒检测灵敏度高，检测灵敏度可达到0.01～0.001ng/ml，比间接ELISA和DAS-ELISA检测灵敏度提高100～1000倍。
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