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    一种用于外泌体二次纯化的试剂盒、方法及应用
    1.
    发明公开
    一种用于外泌体二次纯化的试剂盒、方法及应用 无效

    公开(公告)号：CN117106713A

    公开(公告)日：2023-11-24

    申请号：CN202311378760.1

    申请日：2023-10-24

    申请人： 北京恩泽康泰生物科技有限公司

    发明人： 李鸿艳 ,  刘倩茹 ,  赵立波 ,  孔关义 ,  李志

    IPC分类号： C12N5/078

    摘要： 本发明公开了一种用于外泌体二次纯化的试剂盒、方法及应用。所述试剂盒含有：带有双层结构填料的纯化脱盐空柱，所述双层结构为核心微球和薄层外壳，所述核心微球由阴离子配基和琼脂糖交联得到，所述薄层外壳的组成包括琼脂糖。本发明试剂盒及方法适用于小体积微量样本或二次纯化，无需进一步稀释，回收率高、快速提取、可重复性强、外泌体完整性好、可高效除杂、对设备要求低、克服了传统排阻色谱在低样品的外泌体分离方面的局限性。

    m6A RNA甲基化位点检测方法
    4.
    发明授权
    m6A RNA甲基化位点检测方法 有权

    公开(公告)号：CN113999898B

    公开(公告)日：2022-04-19

    申请号：CN202111653794.8

    申请日：2021-12-31

    申请人： 北京恩泽康泰生物科技有限公司

    发明人： 程敏 ,  秦伟伟 ,  林海军 ,  陈静 ,  李志 ,  孔关义

    IPC分类号： C12Q1/6869

    摘要： 本发明提供一种m6A RNA甲基化位点检测方法，属于分子生物学领域。本发明是专门针对低起始量总RNA检测m6A位点的方法，整个实验过程简捷，RNA完整性高，文库质量好，尤其适用于临床样本起始量少的情况，可实现高效m6A甲基化RNA获取，通过去rRNA链特异性建库最终得到浓度足够高的文库，完成上机测序和后续的测序相关的应用，有效实现临床微量样本和珍贵临床样本mRNA和IncRNA中m6A甲基化位点的识别，可应用于机制探讨、诊断治疗等领域m6A甲基化的研究。

    一种快速提取组织胞外囊泡的分离富集方法
    5.
    发明公开
    一种快速提取组织胞外囊泡的分离富集方法 无效

    公开(公告)号：CN112501112A

    公开(公告)日：2021-03-16

    申请号：CN202011524931.3

    申请日：2020-12-22

    申请人： 北京恩泽康泰生物科技有限公司

    发明人： 王程程 ,  秦伟伟 ,  程敏 ,  林海军 ,  孔关义

    IPC分类号： C12N5/071

    摘要： 本发明提供一种快速提取组织胞外囊泡的分离富集方法，包括：A、将目标组织用机械法切碎加入组织消化酶进行组织解离，所得组织解离液经过滤得到组织细胞悬液；B、对组织细胞悬液依次进行差速离心、超离、SEC排阻和超滤，进行组织胞外囊泡的富集纯化。本发明提供的组织胞外囊泡分离富集方法极大简化了分离组织胞外囊泡的步骤，节省了富集时间，全程只需要4～5h，所富集的胞外囊泡纯度高、可溶性杂蛋白污染小，实用性更加广泛，使用微量组织样本富集的胞外囊泡即可满足后续NTA、WB、电镜和转录组等分析。

    基于脂质体的囊泡分离效率评估和质控的方法
    6.
    发明授权
    基于脂质体的囊泡分离效率评估和质控的方法 有权

    公开(公告)号：CN108088831B

    公开(公告)日：2020-08-04

    申请号：CN201810049109.2

    申请日：2018-01-18

    申请人： 北京恩泽康泰生物科技有限公司

    发明人： 赵立波 ,  孔关义 ,  李志

    IPC分类号： G01N21/64 ,  G01N1/28 ,  G01N1/34

    摘要： 本发明提供一种基于脂质体的囊泡分离效率评估和质控的方法，先利用磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、胆固醇酯等脂质，以及荧光染料来制备带有荧光的脂质体；将带有荧光的脂质体分别与血清、血浆及尿液样本混合后使用不同的分离方法，包括超速离心、膜亲和法、聚合物沉淀及色谱等方法进行囊泡分离；对分离得到的囊泡进行荧光测定。通过原始脂质体的荧光强度及分离得到的囊泡中的荧光强度即可计算不同方法囊泡的提取效率及不同临床样本处理过程中的提取效率。本发明利用荧光脂质体来评估囊泡的提取效率，为囊泡应用于临床需求的稳定质控体系提供了强有力的技术支持，同时提供了一种肉眼即可观察跟踪囊泡分离过程的有效方法。

    用于膀胱癌诊断和复发监控的生物标志物及检测试剂盒
    8.
    发明授权
    用于膀胱癌诊断和复发监控的生物标志物及检测试剂盒 有权

    公开(公告)号：CN109576370B

    公开(公告)日：2021-11-02

    申请号：CN201811581939.6

    申请日：2018-12-24

    申请人： 北京恩泽康泰生物科技有限公司

    发明人： 孔关义 ,  孙圣坤 ,  陈苏红 ,  秦宏亮 ,  刘翔 ,  陈亚庆 ,  李鸿艳

    IPC分类号： C12Q1/6886 ,  C12N15/11

    摘要： 本发明提供用于膀胱癌诊断和复发监控的生物标志物及检测试剂盒。所述生物标志物为基因UBE2C，以及如下基因BIRC5、UBE2C、CDK1、MMP11、TPX2、CDC20、MYBL2、TK1、FOXM1、CCNB1和UCA1中的至少一种。本发明提供的生物标志物及其组合，能够准确地确诊个体是否患有膀胱癌以及是否有复发的可能，具有较高的灵敏性，其复发监控模型性能的AUC达0.955，灵敏度和NPV为100％时，特异可达80％以上；其诊断模型性能的AUC达0.99，灵敏度及NPV均为98％以上时，特异性达92％，本发明基于尿液检测提供了一种无创的检测方法，可有效避免患者频繁使用膀胱镜所遭受的痛苦。

    一种用于检测miRNA的引物和探针组合的设计方法及其应用
    9.
    发明公开
    一种用于检测miRNA的引物和探针组合的设计方法及其应用 无效

    公开(公告)号：CN113373203A

    公开(公告)日：2021-09-10

    申请号：CN202110934236.2

    申请日：2021-08-16

    申请人： 北京恩泽康泰生物科技有限公司

    发明人： 王程程 ,  秦伟伟 ,  林海军 ,  陈静 ,  孔关义

    IPC分类号： C12Q1/6851 ,  C12N15/11

    摘要： 本发明涉及qPCR检测技术领域，尤其涉及一种用于检测miRNA的引物和探针组合的设计方法及其应用。设计方法包括：针对待测miRNA的核苷酸序列，设计特异性长链引物RT、特异性短链引物PF、通用短链引物PR和通用探针PP；特异性长链引物RT包括非特异的通用序列Q1和特异性的序列Q2；特异性的序列Q2为与待测miRNA的3’端起的4~8个碱基互补的特异性序列；特异性短链引物PF包括保护碱基和与待测miRNA的5’端起始的12~18个碱基相同的序列。本发明将两步加尾法整合为一步加尾法，在操作简便、节省时间的同时降低污染率，可以准确实现外泌体miRNA的检测。

    基于排阻色谱和超滤技术的胞外囊泡分离和富集方法
    10.
    发明授权
    基于排阻色谱和超滤技术的胞外囊泡分离和富集方法 有权

    公开(公告)号：CN110511902B

    公开(公告)日：2020-10-02

    申请号：CN201910639939.5

    申请日：2019-07-16

    申请人： 北京恩泽康泰生物科技有限公司

    发明人： 周卫 ,  赵立波 ,  孔关义 ,  王德键 ,  王耀杰 ,  闵力

    IPC分类号： C12N5/071 ,  C12N5/078 ,  C09K11/06

    摘要： 本发明提供一种基于排阻色谱和超滤技术的胞外囊泡分离和富集方法，包括：将荧光染料与体液混合，加样至排阻色谱柱，根据荧光强度收集馏分并合并，合并的馏分依次用蛋白酶K和RNaseA处理，最后超滤浓缩。本发明将排阻色谱法与超滤法相结合解决了排阻色谱法产物浓度偏低的问题，同时引入荧光染料作为示踪外参，不仅能够准确定位EVs所处的馏分，在进入下一步操作前还能排除因滤膜破损导致的EVs损失。本发明还提供能从体液中分离富集高纯度细胞外囊泡的试剂盒。本方法无需超速离心，即可从体液中分离获得高纯度的EVs，同时配合蛋白酶K和RNaseA处理，能有效消除体液中非囊泡来源的核酸污染，从而大幅提高细胞外囊泡的核酸纯度。