-
公开(公告)号：CN102604932A
公开(公告)日：2012-07-25
申请号：CN201110382308.3
申请日：2011-11-25
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N15/10
摘要： 本发明公开了一种基因消除PCR的方法，本项发明可以消除混合基因群体中的非目标基因。本项发明的技术要点是把非目标基因做成或人工合成短序列基因消除引物，把含目标基因的混合基因群体酶切加上带有一个碱基误配的限制性酶切位点及带有Poly(dA)的接头，经过纯化作为模板，在PCR反应中，通过基因消除引物与模板退火延伸恢复正确的酶切位点，然后用耐热的限制性酶酶切从而消除非目标基因的接头，使其无法得到扩增。以上反应是利用PCR仪做如下循环：94℃，30秒；60℃，40秒；75℃，8分钟，经过12至18个循环，富集目标基因，然后常规PCR进一步扩增目标基因。本发明高效快速，操作简便，成本低廉，可重复性高，分离效果好且假阳性率低。
-
公开(公告)号：CN102604932B
公开(公告)日：2013-06-19
申请号：CN201110382308.3
申请日：2011-11-25
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N15/10
摘要： 本发明公开了一种基因消除PCR的方法，本项发明可以消除混合基因群体中的非目标基因。本项发明的技术要点是把非目标基因做成或人工合成短序列基因消除引物，把含目标基因的混合基因群体酶切加上带有一个碱基误配的限制性酶切位点及带有Poly(dA)的接头，经过纯化作为模板，在PCR反应中，通过基因消除引物与模板退火延伸恢复正确的酶切位点，然后用耐热的限制性酶酶切从而消除非目标基因的接头，使其无法得到扩增。以上反应是利用PCR仪做如下循环：94℃，30秒；60℃，40秒；75℃，8分钟，经过12至18个循环，富集目标基因，然后常规PCR进一步扩增目标基因。本发明高效快速，操作简便，成本低廉，可重复性高，分离效果好且假阳性率低。
-
公开(公告)号：CN103774241B
公开(公告)日：2015-04-08
申请号：CN201210395295.8
申请日：2012-10-18
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种文库对文库的酵母双杂交规模化筛选互作蛋白质的方法，以基因组规模的cDNA作为Bait筛选同样是基因组规模的cDNA Library。在本技术实施过程中采取对cDNA文库进行均一化处理的方法来降低高丰富度互作蛋白对低丰富度互作蛋白的掩盖作用，提高了筛选的效率；利用酵母URA3基因的特性自动的去除bait cDNA中具有自激活作用的序列。本发明建立了一种可行性高，成本低廉，实验条件要求低，工作量较小的利用文库对文库的酵母双杂交技术大规模筛选互作蛋白质的方法，并成功的应用于了病原物-寄主植物互作蛋白质的筛选。
-
公开(公告)号：CN103774241A
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201210395295.8
申请日：2012-10-18
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种文库对文库的酵母双杂交规模化筛选互作蛋白质的方法，以基因组规模的cDNA作为Bait筛选同样是基因组规模的cDNA？Library。在本技术实施过程中采取对cDNA文库进行均一化处理的方法来降低高丰富度互作蛋白对低丰富度互作蛋白的掩盖作用，提高了筛选的效率；利用酵母URA3基因的特性自动的去除baitc？DNA中具有自激活作用的序列。本发明建立了一种可行性高，成本低廉，实验条件要求低，工作量较小的利用文库对文库的酵母双杂交技术大规模筛选互作蛋白质的方法，并成功的应用于了病原物-寄主植物互作蛋白质的筛选。
-
-
-
搜索结果
4 条记录 (耗时 0.041 秒)
