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公开(公告)号：CN1854301B
公开(公告)日：2011-01-12
申请号：CN200510068186.5
申请日：2005-04-29
申请人： 华北制药集团新药研究开发有限责任公司
摘要： 本发明公开了一种表达人血清白蛋白的载体和工程菌。本发明所提供的表达人血清白蛋白的载体，是在巴斯德毕赤酵母表达载体的多克隆位点插入有人血清白蛋白编码序列的质粒。该人血清白蛋白编码序列的5′端紧密连接有分泌信号肽及前导肽编码序列，分泌信号肽及前导肽编码序列的5′端紧密连接有巴斯德毕赤酵母AOX1基因的高表达特征序列GAAACG。含有上述表达人血清白蛋白的载体的巴斯德毕赤酵母菌株，特别是巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)HSA75-10CGMCCNo.1360在廉价的非选择培养基上高密度连续培养可获得较高的人血清白蛋白产量(10g/L培养基上清)，分泌的HSA占所有分泌蛋白的80％以上，利于工业规模的分离和下游加工。
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公开(公告)号：CN1854306A
公开(公告)日：2006-11-01
申请号：CN200510068171.9
申请日：2005-04-29
申请人： 华北制药集团新药研究开发有限责任公司
摘要： 本发明公开了一种变温发酵生产重组人血清白蛋白HSA的方法，包括用酵母菌属或毕赤氏酵母属的酵母菌株经种子培养和发酵生产的步骤，所述发酵生产经过两个培养阶段，第一阶段为HSA生产期，温度控制在27－30℃，并监控发酵液中细胞浓度直至OD600数值为200时降温；第二阶段为HSA诱导期，温度控制在18－23℃，并加入诱导剂甲醇直至发酵结束。本发明在发酵过程中采用变温控制以及补加特定的诱导剂，明显提高了宿主细胞的目的蛋白HSA的表达量，同时减少了蛋白的着色程度，为工业化生产HSA提供了可能。
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公开(公告)号：CN1854306B
公开(公告)日：2011-07-27
申请号：CN200510068171.9
申请日：2005-04-29
申请人： 华北制药集团新药研究开发有限责任公司
摘要： 本发明公开了一种变温发酵生产重组人血清白蛋白HSA的方法，包括用酵母菌属或毕赤氏酵母属的酵母菌株经种子培养和发酵生产的步骤，所述发酵生产经过两个培养阶段，第一阶段为HSA生产期，温度控制在27-30℃，并监控发酵液中细胞浓度直至OD600数值为200时降温；第二阶段为HSA诱导期，温度控制在18-23℃，并加入诱导剂甲醇直至发酵结束。本发明在发酵过程中采用变温控制以及补加特定的诱导剂，明显提高了宿主细胞的目的蛋白HSA的表达量，同时减少了蛋白的着色程度，为工业化生产HSA提供了可能。
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公开(公告)号：CN1854155B
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN200510068187.X
申请日：2005-04-29
申请人： 华北制药集团新药研究开发有限责任公司
摘要： 本发明公开了一种纯化rHAS的方法。本发明所提供的纯化rHSA的方法，是将含rHSA的发酵上清依次经过高盐阳离子交换层析、疏水交换层析和弱阴离子交换层析，得到纯化rHSA，其中，所述含rHSA的发酵上清在经过高盐阳离子交换层析前还经过在稳定剂、脱色剂和蛋白酶抑制剂存在下在60-75℃加热处理，然后将加热处理后的溶液调节pH4.0-5.5的步骤；经过所述阳离子交换层析的溶液或经过所述疏水交换层析的溶液还经过硼酸盐处理。本发明方法实验周期短，产品纯度高，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN1854301A
公开(公告)日：2006-11-01
申请号：CN200510068186.5
申请日：2005-04-29
申请人： 华北制药集团新药研究开发有限责任公司
摘要： 本发明公开了一种表达人血清白蛋白的载体和工程菌。本发明所提供的表达人血清白蛋白的载体，是在巴斯德毕赤酵母表达载体的多克隆位点插入有人血清白蛋白编码序列的质粒。该人血清白蛋白编码序列的5′端紧密连接有分泌信号肽及前导肽编码序列，分泌信号肽及前导肽编码序列的5′端紧密连接有巴斯德毕赤酵母AOX1基因的高表达特征序列GAAACG。含有上述表达人血清白蛋白的载体的巴斯德毕赤酵母菌株，特别是巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)HSA75－10 CGMCCNo.1360在廉价的非选择培养基上高密度连续培养可获得较高的人血清白蛋白产量(10g/L培养基上清)，分泌的HSA占所有分泌蛋白的80％以上，利于工业规模的分离和下游加工。
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公开(公告)号：CN1854155A
公开(公告)日：2006-11-01
申请号：CN200510068187.X
申请日：2005-04-29
申请人： 华北制药集团新药研究开发有限责任公司
摘要： 本发明公开了一种纯化rHAS的方法。本发明所提供的纯化rHSA的方法，是将含rHSA的发酵上清依次经过高盐阳离子交换层析、疏水交换层析和弱阴离子交换层析，得到纯化rHSA，其中，所述含rHSA的发酵上清在经过高盐阳离子交换层析前还经过在稳定剂、脱色剂和蛋白酶抑制剂存在下在60－75℃加热处理，然后将加热处理后的溶液调节pH4.0－5.5的步骤；经过所述阳离子交换层析的溶液或经过所述疏水交换层析的溶液还经过硼酸盐处理。本发明方法实验周期短，产品纯度高，具有良好的应用前景。
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