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公开(公告)号：CN110195071A
公开(公告)日：2019-09-03
申请号：CN201910341731.5
申请日：2019-04-26
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种猪圆环病毒3型（PCV3）感染性克隆的构建方法及鉴定方法，构建时利用圆环病毒本身的特性，即PCV3的核酸为环状DNA，任何位置都可以看做是起始位点也可以看做是终点的特征，首先对PCV3的DNA序列进行重排，再对其进行改造。以往的研究仅是根据临床组织进行PCV3病毒的鉴定，对于检测病原的Western blot鉴定标准一直未见报道。因此，本发明在制备PCV3 Cap单克隆抗体的基础上，再进行感染性克隆的构建及鉴定。本发明方法不利用外源质粒获得PCV3感染性克隆，从而排除外源基因的感染；设计独特的检测引物，该引物仅能对环状PCV3 DNA进行PCR检测，对于成环前的PCV3 DNA不能进行PCR检测。PCR检测使用了PCV3的特异性单克隆抗体对其进行检测，实验数据更加可信。
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公开(公告)号：CN108276480A
公开(公告)日：2018-07-13
申请号：CN201810067056.7
申请日：2018-01-24
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： C07K14/01 , G01N33/68 , G01N33/569
摘要： 本发明公开了PCV3抗原表位的多肽序列筛选方法，包括五条多其氨基酸序列分别为PCV3-1：GTPQNNKPWH；PCV3-2：SPAQQTKTMF；PCV3-3：WLQDDPYAESSTRKV；PCV3-4：MTSKKKHSRY；PCV3-5：VPEKTGMTDFYGTKE。本发明采用ELISA的方法检测PCV2与PCV3的抗血清IgG，通过ELISA的方法，筛选出与PCV3抗体特异性结合的短肽。筛选出的短肽，可以为将来PCV3的亚单位疫苗及相关诊断圆环病毒3感染的试剂，治疗圆环病毒3感染的抗体等提供可靠依据。本发明的优点在于，筛选出的五条多肽抗原性良好，抗原表位经鉴定为PCV3所特有，且序列保守，应用其表位序列可以有效的鉴别诊断动物是否感染PCV3，为以后防治PCV3提供有效的检测手段。
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公开(公告)号：CN110195071B
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN201910341731.5
申请日：2019-04-26
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种猪圆环病毒3型（PCV3）感染性克隆的构建方法及鉴定方法，构建时利用圆环病毒本身的特性，即PCV3的核酸为环状DNA，任何位置都可以看做是起始位点也可以看做是终点的特征，首先对PCV3的DNA序列进行重排，再对其进行改造。以往的研究仅是根据临床组织进行PCV3病毒的鉴定，对于检测病原的Western blot鉴定标准一直未见报道。因此，本发明在制备PCV3 Cap单克隆抗体的基础上，再进行感染性克隆的构建及鉴定。本发明方法不利用外源质粒获得PCV3感染性克隆，从而排除外源基因的感染；设计独特的检测引物，该引物仅能对环状PCV3 DNA进行PCR检测，对于成环前的PCV3 DNA不能进行PCR检测。PCR检测使用了PCV3的特异性单克隆抗体对其进行检测，实验数据更加可信。
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公开(公告)号：CN110174510A
公开(公告)日：2019-08-27
申请号：CN201910341732.X
申请日：2019-04-26
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： G01N33/533 , G01N33/558 , G01N33/577
摘要： 本发明公开了一种PCV3的荧光免疫层析检测卡的制备方法，在粘性底板上依次粘贴样品垫、结合垫（固定抗体）、层析膜和吸水纸，还包括PCV3单克隆抗体的配对标记，是取多支PCV3单克隆抗体分别标记荧光微球，采用双抗体夹心原理：在硝酸纤维膜上的测试区包被抗PCV3抗原单克隆抗体、质控区包被的鸡IgY，荧光标记另外一株PCV3单克隆抗体和羊抗鸡IgY。本发明的优点在于，不需要接种实验室仪器，检测时间快速，检测结果可见。与层析免疫方法不同的是，荧光免疫层析技术采用荧光微球作为标记物，每个微球中可包裹成千上万个荧光分子，大大提高了标记效率，有效的提高了灵敏度；同时荧光微球表面修饰有合适密度的羧基，用于与蛋白或抗体的共价偶联，提高标记物的稳定性。
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