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公开(公告)号：CN118326006A
公开(公告)日：2024-07-12
申请号：CN202410579590.1
申请日：2024-05-11
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/6806 , C12Q1/6869 , C12Q1/70 , C12R1/94
Abstract: 本发明公开了一种用于亚硫酸氢盐测序的样本前处理方法。本发明首先采用纤维素亲和层析法富集高质量的病毒基因组dsRNA，然后对提取得到的病毒基因组dsRNA进行亚硫酸氢盐转化和测序，并探究亚硫酸氢盐的浓度和pH以及反应循环数对亚硫酸氢盐转化的影响。本发明的样本前处理方法既能保持病毒dsRNA的稳定性，又能保证亚硫酸氢盐转化的高效率以供测序等下游实验，且测序后的数据与病毒基因组高度映射，达99％以上，所得数据重复性好，具有良好的重现性。本发明克服了亚硫酸氢盐转化法在病毒dsRNA上的适用性问题，为dsRNA病毒侵染机制的阐明和准确检测提供了技术手段，具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN114807138A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210499882.5
申请日：2022-05-09
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , C12N15/66
Abstract: 本发明公开了一种植物环状RNA过表达载体及其构建方法和应用。本发明的植物环状RNA过表达载体，其含有的植物环状RNA成环框架包括上游框架序列、待表达目的基因序列和下游框架序列，所述的上游框架序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的下游框架序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明构建的植物环状RNA过表达载体能够高效稳定的适用于各种目的基因序列的成环表达，且构建方法操作简单，成环位点准确，为深入研究环状RNA的功能提供了高效简洁的研究手段。
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公开(公告)号：CN109504704B
公开(公告)日：2022-07-12
申请号：CN201811493466.4
申请日：2018-12-07
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种增强单子叶植物抵御RNA病毒侵染的方法，以南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)为模式病毒，首次受限了利用CRISPR/Cas13a系统有效的抑制SRBSDV在植物中的增殖，从而提高植物的抗病能力。鉴于此方法的设计仅基于病毒的基因组序列，而不需要了解病毒基因的具体功能，所以该方法可以广泛地应用于抵御序列已知的各种RNA病毒。
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公开(公告)号：CN109504704A
公开(公告)日：2019-03-22
申请号：CN201811493466.4
申请日：2018-12-07
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种增强单子叶植物抵御RNA病毒侵染的方法，以南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)为模式病毒，首次受限了利用CRISPR/Cas13a系统有效的抑制SRBSDV在植物中的增殖，从而提高植物的抗病能力。鉴于此方法的设计仅基于病毒的基因组序列，而不需要了解病毒基因的具体功能，所以该方法可以广泛地应用于抵御序列已知的各种RNA病毒。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104651537B
公开(公告)日：2017-04-12
申请号：CN201510105768.X
申请日：2015-03-11
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种同时检测水稻四种病毒的多重PCR检测方法，通过对水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus，RGDV)、水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus，RRSV)、南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black‑streaked dwarf virus，SRBSDV)和水稻黑条矮缩病毒(Rice black‑streaked dwarf virus，RBSDV)的引物浓度、酶的用量和PCR扩增条件等的优化，建立了一种同时检测水稻四种病原的方法。本方法主要包括以四种病毒基因序列为模板设计特异扩增引物；样品总RNA的提取；四重PCR优化；PCR扩增产物的凝胶电泳检测及结果分析。本发明实现了对田间复合侵染的水稻样品的快速检测，检测结果可靠、准确、特异性强，并缩短了检测时间，有利于研究田间4种病害的发生程度，在农业生产上具有重要的指导意义，为制定科学的病虫害防控体系提供了理论依据。
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公开(公告)号：CN117106078B
公开(公告)日：2024-09-17
申请号：CN202310884139.6
申请日：2023-07-18
Applicant: 华南农业大学
IPC: C07K16/12 , G01N33/569 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种水稻橙叶植原体抗原膜蛋白多克隆抗体及其应用。本发明通过重组表达水稻橙叶植原体抗原膜蛋白的亲水结构域，以此为免疫原，制备得到了可用于特异性检测水稻橙叶植原体的ROLP‑Amp‑H多克隆抗体，所述多克隆抗体的检测特异性好，检测灵敏度高，可将其用于制备水稻橙叶植原体的检测产品。此外，本发明还提供了利用所述ROLP‑Amp‑H多克隆抗体检测水稻橙叶植原体的Western blot检测方法和Dot‑Elisa检测方法，不仅为水稻橙叶植原体检测提供了新的方法，同时也有助于更为简单有效的检测水稻橙叶植原体的产品的开发，有助于水稻橙叶病的防治。
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公开(公告)号：CN117106078A
公开(公告)日：2023-11-24
申请号：CN202310884139.6
申请日：2023-07-18
Applicant: 华南农业大学
IPC: C07K16/12 , G01N33/569 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种水稻橙叶植原体抗原膜蛋白多克隆抗体及其应用。本发明通过重组表达水稻橙叶植原体抗原膜蛋白的亲水结构域，以此为免疫原，制备得到了可用于特异性检测水稻橙叶植原体的ROLP‑Amp‑H多克隆抗体，所述多克隆抗体的检测特异性好，检测灵敏度高，可将其用于制备水稻橙叶植原体的检测产品。此外，本发明还提供了利用所述ROLP‑Amp‑H多克隆抗体检测水稻橙叶植原体的Western blot检测方法和Dot‑Elisa检测方法，不仅为水稻橙叶植原体检测提供了新的方法，同时也有助于更为简单有效的检测水稻橙叶植原体的产品的开发，有助于水稻橙叶病的防治。
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公开(公告)号：CN106755317A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611040208.1
申请日：2016-11-11
Applicant: 华南农业大学
CPC classification number: C12Q1/689 , C12Q1/686 , C12Q2565/125
Abstract: 本发明提供一种用于检测水稻橙叶病植原体的引物，所述用于检测水稻橙叶病植原体的引物包括上游引物及下游引物，所述上游引物具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，所述下游引物具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。本发明所述引物为检测水稻橙叶病植原体的特异性引物，采用本发明所述特异性引物，只需要进行一次PCR扩增，通过电泳结果是否有特异性条带即可确定检测样品是否被水稻橙叶植原体感染，不需要通过测序进行确定，提高检测的特异性、灵敏性，节约时间和经济成本，方法操作简单，易于推广。
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公开(公告)号：CN116574843A
公开(公告)日：2023-08-11
申请号：CN202211608058.5
申请日：2022-12-14
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12N15/11 , C12Q1/6844 , C12R1/94
Abstract: 本发明公开了一种可视化检测水稻条纹花叶病毒的试剂盒，所述试剂盒基于RT‑RAA与CRISPR‑Cas12a结合的，含有基于RT‑RAA与CRISPR‑Cas12a结合的可视化检测水稻条纹花叶病毒的组合物，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示的检测引物、核苷酸序列为FAM‑CCCCCCCC‑BHQ1的ssDNA荧光探针以及核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的crRNA。该试剂盒具有检测特异性好，灵敏度高，可视化，无需专业实验室仪器设备等优点；对感病水稻和单头传毒昆虫进行检测，检测效果均优于RT‑PCR，且适用于田间快速检测。
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