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公开(公告)号：CN108285906B
公开(公告)日：2021-07-09
申请号：CN201711477805.5
申请日：2017-12-29
申请人： 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。本发明在供体质粒中引入gRNA靶点序列，利用细胞内转录gRNA诱导Cas9核酸酶切割靶基因同时，线性化供体质粒，大大简化试验步骤，节约人力，且有利于提高共转染效率。本发明定点整合所用载体较少，同源臂大小适中，更有利于获得转基因细胞系，将高效定点整合技术，高活力定点转基因细胞培育技术与体细胞克隆技术结合，有利于定点整合转基因动物高效制备，加快转基因动物新品种培育速度。
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公开(公告)号：CN110846336A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911170220.8
申请日：2019-11-26
申请人： 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶，植酸酶，双葡聚糖酶和双纤维素酶活性，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、葡聚糖，纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低，基因位置确定困难问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到增强多基因高效共表达效率的目的。此外，还可以解决单个来源的纤维素酶基因表达和水解纤维素效果差的问题。
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公开(公告)号：CN110846297B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN201911170441.5
申请日：2019-11-26
申请人： 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种多功能融合酶和多功能融合酶真核表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶、植酸酶、果胶酶，葡聚糖酶和纤维素酶，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、果胶、葡聚糖酶和纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低的问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到多基因高效共表达的目的。
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公开(公告)号：CN106086068B
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201610397567.6
申请日：2016-06-06
申请人： 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种多顺反子、唾液腺特异性表达该多顺反子的载体及其构建方法，所述多基因共表达的多顺反子具有如SEQ ID No:1所示的碱基序列，所述唾液腺特异性表达多顺反子的载体具有如SEQ ID No:3所示的核苷酸序列，其是以多顺反子真核表达载体pCD‑PXAT和pPB‑mPSP‑neoGFP载体为原料构建得到的。本发明构建的多顺反子能共表达纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶、果胶酶与植酸酶，囊括了常规饲料中NSP酶的所有主要成员和植酸酶，这些酶都能较好的兼容动物胃肠消化道pH环境，具有较好的胃蛋白和胰蛋白酶耐受性，且始终保持较高的活性，克服了传统饲料用酶制剂在加工，生产使用中缺陷和问题，由于是动物自身分泌，几乎不存在成本问题。
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公开(公告)号：CN106086068A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610397567.6
申请日：2016-06-06
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种多顺反子、唾液腺特异性表达该多顺反子的载体及其构建方法，所述多基因共表达的多顺反子具有如SEQ ID No:1所示的碱基序列，所述唾液腺特异性表达多顺反子的载体具有如SEQ ID No:3所示的核苷酸序列，其是以多顺反子真核表达载体pCD‑PXAT和pPB‑mPSP‑neoGFP载体为原料构建得到的。本发明构建的多顺反子能共表达纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶、果胶酶与植酸酶，囊括了常规饲料中NSP酶的所有主要成员和植酸酶，这些酶都能较好的兼容动物胃肠消化道pH环境，具有较好的胃蛋白和胰蛋白酶耐受性，且始终保持较高的活性，克服了传统饲料用酶制剂在加工，生产使用中缺陷和问题，由于是动物自身分泌，几乎不存在成本问题。
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公开(公告)号：CN110846337B
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN201911170226.5
申请日：2019-11-26
申请人： 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号： C12N15/62 , C12N15/873 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种多功能融合酶XABT基因及构建方法和应用，该多功能融合酶XABT基因，可以同时表达表达木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶和纤维素酶，并具有高效的酶活，该多功能融合酶强化了葡聚糖酶活性，对含葡聚糖较高的大麦、燕麦、黑麦、小麦及其麸皮类日粮具有更强的消化能力。亦可以用于制备节粮环保转基因经济动物，消除饲料中主要抗营养因子，达到提高饲料消化率，减少污染排放的目的。
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公开(公告)号：CN111253283A
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN202010071175.7
申请日：2020-01-21
申请人： 新兴县国研科技有限公司 , 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号： C07C251/84 , C07C249/16 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K14/47 , C07K16/44 , G01N33/58 , G01N33/577
摘要： 本发明公开了一种金刚烷胺半抗原、抗原及其化学发光酶联免疫检测试剂盒与应用。本发明公开一种金刚烷胺半抗原，同时也公开相应的人工抗原和化学发光酶联免疫检测试剂盒及其应用。本发明提供的金刚烷胺半抗原与载体蛋白偶联得到金刚烷胺抗原。金刚烷胺抗原可应用于制备金刚烷胺特异性抗体。在抗体制备基础上建立了金刚烷胺化学发光酶联免疫检测方法，其检测范围为0～16.2μg/L，半抑制浓度为0.45μg/L，检出限为0.20μg/L，添加回收率为90.00％～104.22％，整个检测过程仅仅需要30min左右即可完成，且检出限更低、灵敏度更高，为组织样品中金刚烷胺的残留检测提供一种更方便、快捷和简单的方法。
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公开(公告)号：CN110846337A
公开(公告)日：2020-02-28
申请号：CN201911170226.5
申请日：2019-11-26
申请人： 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号： C12N15/62 , C12N15/873 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种多功能融合酶XABT基因及构建方法和应用，该多功能融合酶XABT基因，可以同时表达表达木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶和纤维素酶，并具有高效的酶活，该多功能融合酶强化了葡聚糖酶活性，对含葡聚糖较高的大麦、燕麦、黑麦、小麦及其麸皮类日粮具有更强的消化能力。亦可以用于制备节粮环保转基因经济动物，消除饲料中主要抗营养因子，达到提高饲料消化率，减少污染排放的目的。
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公开(公告)号：CN110846336B
公开(公告)日：2022-12-20
申请号：CN201911170220.8
申请日：2019-11-26
申请人： 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种多功能融合酶XAET和多功能融合酶定点整合真核特异表达载体及其构建方法，该多功能融合酶可以表达木聚糖酶，植酸酶，双葡聚糖酶和双纤维素酶活性，将其用于后期制备相应的转基因动物，该动物将自身分泌这些酶，起到消化饲料中木聚糖、植酸、葡聚糖，纤维素等抗营养因子，达到提高饲料利用率，减少污染排放的功效。同时，解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题；解决2A连接肽多基因共表达效率低，基因位置确定困难问题，及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题，达到增强多基因高效共表达效率的目的。此外，还可以解决单个来源的纤维素酶基因表达和水解纤维素效果差的问题。
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公开(公告)号：CN115124443A
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN202210961849.X
申请日：2022-08-11
申请人： 华南农业大学 , 温氏食品集团股份有限公司
IPC分类号： C07C275/40 , C07C273/18 , C07K14/765 , C07K14/77 , C07K14/79 , C07K14/795 , C07K16/44 , G01N33/53 , G01N33/543 , G01N33/558 , G01N33/58
摘要： 本发明公开了一种尼卡巴嗪代谢物半抗原、人工抗原及其制备方法与应用。本发明所提供的尼卡巴嗪代谢物半抗原，合成方法简单、纯度高、产率高。将该尼卡巴嗪代谢物半抗原分别与血蓝蛋白和卵清蛋白偶联，分别作为免疫原和包被原。所述免疫原免疫动物制备得到尼卡巴嗪代谢物单克隆抗体，结合所述包被原和羊抗鼠IgG，用于制备尼卡巴嗪代谢物酶联免疫试剂盒、尼卡巴嗪代谢物胶体金检测试剂盒和尼卡巴嗪代谢物时间分辨荧光定量检测试剂盒。上述试剂盒用于检测动物肉和蛋类等样品中的尼卡巴嗪代谢物，灵敏度高、重复性好、准确性好、特异性高，在常温下保存期达一年。
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