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公开(公告)号：CN108220269B
公开(公告)日：2021-07-20
申请号：CN201711471839.3
申请日：2017-12-29
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N9/20
Abstract: 本发明公开了一种耐过氧化氢脂肪酶AflB晶体及其制备方法，该晶体为短棱柱状形貌，其空间结构为精细三维结构，结构中含有440个氨基酸，在每个不对称单元中含有3个分子，每个分子含有21个α螺旋结构和6个β折叠结构；结构中具有α＝β＝γ＝90°晶包元，晶体的蛋白空间群为P41212。本发明提供的耐过氧化氢脂肪酶AflB晶体为解析脂肪酶AflB分子结构提供必要条件，为后续蛋白质工程提高脂肪酶AflB性能提供基础。
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公开(公告)号：CN107916257A
公开(公告)日：2018-04-17
申请号：CN201810017359.8
申请日：2018-01-09
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了T1脂肪酶突变体和应用，所述突变体是对序列SEQ ID NO：1中氨基酸取代位置至少发生如下任意一种突变：(1)采用“原始氨基酸-位置-替换的氨基酸”表示脂肪酶突变体中单点突变的氨基酸L359S、I362E或V364N；(2)采用氨基酸序列片段置换方式发生突变，将野生型T1的288-291位氨基酸残基Asn-Ala-Phe-Ser置换成Glu-Phe-Thr-Lys。突变体水解甘油酯的活性有不同程度的提高，分别是野生型T1的6、6、4、6、3、5倍，而突变体的最适反应温度及pH并没有明显变化。本发明所得突变体，更适合生物化工行业的应用，尤其适应用于难熔油脂的改性。
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公开(公告)号：CN107245470A
公开(公告)日：2017-10-13
申请号：CN201710375132.6
申请日：2017-05-24
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种脂肪酶重组大肠杆菌表达菌株、重组脂肪酶和应用，方法如下：(1)将脂肪酶GZEL基因克隆到pFL‑B62cl表达载体上，构建得到重组质粒；所述脂肪酶GZEL基因的碱基序列如SEQ ID NO:2所示；(2)将所得的重组质粒转化大肠杆菌Shuffle T7感受态细胞，挑选阳性克隆，获得重组大肠杆菌表达菌株。以获得的重组大肠杆菌表达菌株为发酵菌株进行液体发酵，制备重组脂肪酶。本发明酶来源方便，发酵工艺简单、成本低；本发明同时公开了该酶在植物油酶法脱胶中的应用。将所制备的重组脂肪酶在30℃条件下脱胶反应3h即可将毛油中的磷含量降低到10mg/kg以下，与传统酶法脱胶工艺相比，能降低反应能耗。
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公开(公告)号：CN106834336B
公开(公告)日：2020-12-22
申请号：CN201710088628.5
申请日：2017-02-20
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种哈茨木霉酸性蛋白酶P6281的异源表达及纯化方法。通过提取哈茨木霉的RNA反转录获得cDNA，通过PCR获得酸性蛋白酶基因并插入到表达载体中，重组质粒电转化导入毕赤酵母GS115进行诱导表达，再利用镍柱亲和层析和分子筛层析获得较纯的酶产物。本发明首次成功表达纯化了哈茨木霉酸性蛋白酶P6281，该方法提高了P6281蛋白酶的产量，且获得的酸性蛋白酶酶活远高于现有的木霉属酸性蛋白酶。
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公开(公告)号：CN107916257B
公开(公告)日：2020-07-28
申请号：CN201810017359.8
申请日：2018-01-09
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了T1脂肪酶突变体和应用，所述突变体是对序列SEQ ID NO：1中氨基酸取代位置至少发生如下任意一种突变：(1)采用“原始氨基酸‑位置‑替换的氨基酸”表示脂肪酶突变体中单点突变的氨基酸L359S、I362E或V364N；(2)采用氨基酸序列片段置换方式发生突变，将野生型T1的288‑291位氨基酸残基Asn‑Ala‑Phe‑Ser置换成Glu‑Phe‑Thr‑Lys。突变体水解甘油酯的活性有不同程度的提高，分别是野生型T1的6、6、4、6、3、5倍，而突变体的最适反应温度及pH并没有明显变化。本发明所得突变体，更适合生物化工行业的应用，尤其适应用于难熔油脂的改性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108220269A
公开(公告)日：2018-06-29
申请号：CN201711471839.3
申请日：2017-12-29
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N9/20
Abstract: 本发明公开了一种耐过氧化氢脂肪酶AflB晶体及其制备方法，该晶体为短棱柱状形貌，其空间结构为精细三维结构，结构中含有440个氨基酸，在每个不对称单元中含有3个分子，每个分子含有21个α螺旋结构和6个β折叠结构；结构中具有α＝β＝γ＝90°晶包元，晶体的蛋白空间群为P41212。本发明提供的耐过氧化氢脂肪酶AflB晶体为解析脂肪酶AflB分子结构提供必要条件，为后续蛋白质工程提高脂肪酶AflB性能提供基础。
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公开(公告)号：CN106834336A
公开(公告)日：2017-06-13
申请号：CN201710088628.5
申请日：2017-02-20
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种哈茨木霉酸性蛋白酶P6281的异源表达及纯化方法。通过提取哈茨木霉的RNA反转录获得cDNA，通过PCR获得酸性蛋白酶基因并插入到表达载体中，重组质粒电转化导入毕赤酵母GS115进行诱导表达，再利用镍柱亲和层析和分子筛层析获得较纯的酶产物。本发明首次成功表达纯化了哈茨木霉酸性蛋白酶P6281，该方法提高了P6281蛋白酶的产量，且获得的酸性蛋白酶酶活远高于现有的木霉属酸性蛋白酶。
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公开(公告)号：CN106818885A
公开(公告)日：2017-06-13
申请号：CN201710088983.2
申请日：2017-02-20
Applicant: 华南理工大学
IPC: A01N63/02 , A01P3/00 , A23B7/154 , A23L3/3463
CPC classification number: A01N63/02 , A23B7/154 , A23L3/3463
Abstract: 本发明公开了一种酸性蛋白酶在制备抑制病原菌制剂中的应用。本发明的发明人在首次成功重组表达纯化了哈茨木霉的酸性蛋白酶P6281的基础上，首次验证了该酶对动植物病原真菌的抑制作用，同时首次将其应用于果蔬保鲜、生物防治和农作物储存防霉中。所用的蛋白酶来自于哈茨木霉，无毒、安全，且不会对环境造成污染；同时，也克服了目前哈茨木霉菌制剂直接施用于果蔬不适宜其生长，而且有可能引起果蔬腐败等问题。本发明可与常用的果蔬保鲜技术配合使用，控制贮藏期间果蔬的灰霉病，有效控制采后腐烂。
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公开(公告)号：CN106818885B
公开(公告)日：2021-05-14
申请号：CN201710088983.2
申请日：2017-02-20
Applicant: 华南理工大学
IPC: A01N63/50 , A01P3/00 , A23B7/154 , A23L3/3463
Abstract: 本发明公开了一种酸性蛋白酶在制备抑制病原菌制剂中的应用。本发明的发明人在首次成功重组表达纯化了哈茨木霉的酸性蛋白酶P6281的基础上，首次验证了该酶对动植物病原真菌的抑制作用，同时首次将其应用于果蔬保鲜、生物防治和农作物储存防霉中。所用的蛋白酶来自于哈茨木霉，无毒、安全，且不会对环境造成污染；同时，也克服了目前哈茨木霉菌制剂直接施用于果蔬不适宜其生长，而且有可能引起果蔬腐败等问题。本发明可与常用的果蔬保鲜技术配合使用，控制贮藏期间果蔬的灰霉病，有效控制采后腐烂。
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公开(公告)号：CN107245470B
公开(公告)日：2020-12-22
申请号：CN201710375132.6
申请日：2017-05-24
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种脂肪酶重组大肠杆菌表达菌株、重组脂肪酶和应用，方法如下：(1)将脂肪酶GZEL基因克隆到pFL‑B62cl表达载体上，构建得到重组质粒；所述脂肪酶GZEL基因的碱基序列如SEQ ID NO:2所示；(2)将所得的重组质粒转化大肠杆菌Shuffle T7感受态细胞，挑选阳性克隆，获得重组大肠杆菌表达菌株。以获得的重组大肠杆菌表达菌株为发酵菌株进行液体发酵，制备重组脂肪酶。本发明酶来源方便，发酵工艺简单、成本低；本发明同时公开了该酶在植物油酶法脱胶中的应用。将所制备的重组脂肪酶在30℃条件下脱胶反应3h即可将毛油中的磷含量降低到10mg/kg以下，与传统酶法脱胶工艺相比，能降低反应能耗。
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