-
公开(公告)号：CN104004849A
公开(公告)日：2014-08-27
申请号：CN201410257785.0
申请日：2014-06-09
申请人： 南京农业大学
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6841 , C12Q2543/10
摘要： 本发明公开了利用黄瓜基因组原位杂交技术快速构建黄瓜中期染色体核型的方法，它是通过提取黄瓜基因组DNA，并将其标备探针。取黄瓜根尖进行酶解，火焰干燥法制片，获得分散度良好的中期染色体制片。将基因组DNA探针变性后杂交到变性的中期染色体制片上，利用高严谨度的杂交条件，使得染色体串联重复序列产生清晰可辨的荧光信号，从而构建黄瓜的中期染色体核型。本发明利用黄瓜基因组DNA作为探针，通过一次GISH快速构建黄瓜中期染色体核型，提高了试验效率。通过此方法，基于黄瓜基因组DNA探针在每条染色体上信号分布模式的不同，可快速构建出黄瓜中期染色体核型，为物种的核型分析研究提供了新的方法与参考。
-
公开(公告)号：CN104593508A
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201510040811.9
申请日：2015-01-23
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明公开了黄瓜6号染色体探针制备的方法和应用。它是基于黄瓜基因组序列，通过RepeatMasker软件和黄瓜基因组数据库BLAST分析选取不含重复序列的DNA序列，利用Primer Premier 5.0软件进行引物设计。通过PCR扩增获得覆盖单染色体的PCR产物，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳纯化，利用核酸浓度测量仪测定浓度后，将每对引物等量的产物进行混池，并用缺刻平移法标记探针，并利用荧光原位杂交技术杂交到染色体制片上，完成单染色体探针的制备和检测应用。通过应用此方法，可以快速获得黄瓜单染色体或者任何染色体区段的探针，可对单染色体或任何染色体的形态结构进行精确的分析研究。
-
公开(公告)号：CN104419763B
公开(公告)日：2017-01-18
申请号：CN201310409784.9
申请日：2013-09-11
申请人： 南京农业大学
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明公开了黄瓜单拷贝基因在染色体上物理定位的方法，它是通过PCR扩增获得黄瓜单拷贝基因，然后对产物进行凝胶电泳回收纯化，以纯化产物为模板进行第二次PCR扩增，然后将第二次PCR产物标备探针。分别取黄瓜根尖和盛花期植株上的花蕾进行酶解，涂片法制片，挑选分散度高的片子，并进一步进行胃蛋白酶处理后，备用。最后将标好的探针杂交到处理好的载玻片上，在荧光显微镜下观察信号。本发明采用PCR扩增后切胶回收，之后再进行二次PCR扩增的方法，不仅可以去除基因组DNA的干扰，而且解决了切胶回收率低的问题；另外涂片法结合胃蛋白酶处理制作背景清晰且分散度高的片子可以提高信号的分辨率；通过此方法，可在染色体上直接检测到的最短长度为2kb的单拷贝基因，为黄瓜的细胞遗传学研究提供了可靠的保证。
-
公开(公告)号：CN104419763A
公开(公告)日：2015-03-18
申请号：CN201310409784.9
申请日：2013-09-11
申请人： 南京农业大学
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6841 , C12Q2543/10 , C12Q2531/113
摘要： 本发明公开了黄瓜单拷贝基因在染色体上物理定位的方法，它是通过PCR扩增获得黄瓜单拷贝基因，然后对产物进行凝胶电泳回收纯化，以纯化产物为模板进行第二次PCR扩增，然后将第二次PCR产物标备探针。分别取黄瓜根尖和盛花期植株上的花蕾进行酶解，涂片法制片，挑选分散度高的片子，并进一步进行胃蛋白酶处理后，备用。最后将标好的探针杂交到处理好的载玻片上，在荧光显微镜下观察信号。本发明采用PCR扩增后切胶回收，之后再进行二次PCR扩增的方法，不仅可以去除基因组DNA的干扰，而且解决了切胶回收率低的问题；另外涂片法结合胃蛋白酶处理制作背景清晰且分散度高的片子可以提高信号的分辨率；通过此方法，可在染色体上直接检测到的最短长度为2kb的单拷贝基因，为黄瓜的细胞遗传学研究提供了可靠的保证。
-
公开(公告)号：CN103114151A
公开(公告)日：2013-05-22
申请号：CN201310081001.9
申请日：2013-03-14
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明提供了一种荧光原位杂交的方法，以黄瓜减数分裂粗线期染色体为靶DNA进行多探针的荧光原位杂交。精选染色体分散良好且形态结构清晰的高质量制片，在80℃的70％去离子甲酰胺中变性，梯度酒精中脱水干燥；采用碱裂解法提取目标质粒DNA，利用缺刻平移法进行标记，配制杂交混合液，90℃变性后，加到载玻片上使靶DNA与探针进行杂交，最后进行信号检测。本发明的荧光原位杂交技术，可用于黄瓜染色体物理图谱的绘制，由于其一次性可加入多个探针，避免了对一张制片多次重复杂交，大大提高了实验效率。本发明在配置杂交混合液的过程中加入了适量的黄瓜全基因组DNA和Cot-1DNA，用于封阻杂信号和重复序列信号，提高了靶信号的辨识率，增加了实验结果的准确性。
-
-
-
-
搜索结果
5 条记录 (耗时 0.04 秒)
