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公开(公告)号：CN116334170A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202310601090.9
申请日：2023-05-26
申请人： 南京农业大学三亚研究院 , 南京农业大学
摘要： 本发明属于畜牧养殖领域，具体涉及一种针对牛源无乳链球菌的鉴别培养基；所述培养基主要包括如下组分：牛肉粉10.0±1.0g/L，胰蛋白胨20.0±2.0g/L，葡萄糖2.0±0.2g/L，碳酸氢钠2.0±0.2g/L，氯化钠2.0±0.2g/L，磷酸氢二钠0.4±0.04g/L、15±1.5g/L琼脂粉、0.2±0.02μg/mL结晶紫、1±0.1g/L七叶苷、0.5±0.05g/L柠檬酸铁，8±0.8μg/mL庆大霉素、15±1.5μg/mL萘啶酮酸和50.0±5.0 mL/L无菌绵羊血。本发明通过将抑制性抗生素、斑点CAMP试验和七叶苷试验相结合建立无乳链球菌鉴别培养基，可准确鉴别奶样中的无乳链球菌，并且成本低廉、易于保存、花费时间短、设备需求少，可用于兽医临床检测奶样中的无乳链球菌。
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公开(公告)号：CN115058397A
公开(公告)日：2022-09-16
申请号：CN202210114436.8
申请日：2022-01-30
申请人： 南京农业大学
摘要： 一种牛肠道病毒分离株及其应用，该病毒的分类命名为牛肠道病毒bovine enterovirus（BEV），该病毒已于2020年7月17日在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)进行的保藏，保藏编号为CCTCC NO:V202028。本发明中的病毒HB1901可在MDBK细胞中高效增殖，病毒浓度可达106.0TCID50/mL，无外源病毒污染；所构建的感染性克隆质粒可直接转染至真核细胞中，无需转录成RNA后再转染，操作简便，成本低廉；携带外源绿色荧光蛋白GFP，并可在细胞中稳定表达。
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公开(公告)号：CN112010951A
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN202010919597.5
申请日：2020-09-04
申请人： 南京农业大学
IPC分类号： C07K14/285 , C12N15/70 , C12N15/31 , C12N1/21 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了一种牛源A型多杀性巴氏杆菌黏附素LH0147基因、其表达载体、表达产物及应用，其中，该LH0147基因如SEQ ID NO.1所示；LH0147基因编码的LH0147蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，上述LH0147基因的重组表达载体可用于体外表达LH0147蛋白，具体方法包括以下步骤：克隆得到权利要求1所述LH0147基因，并将其插入到表达质粒pET-28a的酶切位点salⅠ和EcoRⅠ之间，得到重组表达载体pET-28a-LH0147；将所述重组表达载体ET-28a-LH0147通过热激转化入感受态细胞BL21(DE3)，筛选获得重组基因工程菌；通过在体外接种重组基因工程菌并诱导其表达所述LH0147蛋白。本发明首次体外表达了牛源A型多杀性巴氏杆菌黏附素LH0147的基因序列，以助于研究该蛋白的功能以及致病机制。
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公开(公告)号：CN110669849A
公开(公告)日：2020-01-10
申请号：CN201910907271.8
申请日：2019-09-24
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明公开了一种无乳链球菌的检测试剂盒及其检测方法。该试剂盒包括用于稀释奶液样品的无菌生理盐水、用于菌体裂解的裂解缓冲液，该试剂盒还包括：用于将溶液中残余的乳蛋白和脂类物质溶解在溶液中的洗涤液，用于吸附在分散的二氧化硅的载体上的核酸脱离在溶液中的洗脱液，以及，吸附体系；其中，所述吸附体系为重悬有包埋性单分散二氧化硅磁性微球的裂解缓冲液。本发明通过上述检测试剂盒提取含有待检生物材料的核酸，再通过PCR检测反应体系对上述核酸进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳观察，当220bp处出现条带则判定为阳性样。本发明能直接从奶液中提取无乳链球菌的核酸，检测效率更高、假阳性率也更低。
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公开(公告)号：CN101928711A
公开(公告)日：2010-12-29
申请号：CN201010125002.5
申请日：2010-03-16
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明涉及利用全基因合成技术获得鸡α干扰素基因及进行干扰素蛋白的原核表达，属于生物制药领域。包括对鸡α干扰素基因序列进行密码子的改造并全基因合成此序列，含鸡α干扰素基因的原核表达载体的构建，用所述含鸡α干扰素基因的原核表达载体转化大肠杆菌及诱导表达，蛋白提取及变性复性，及抗病毒活性的研究。试验所得干扰素能抵抗水疱性口炎病毒的攻击，比活性达到1.06×105U/mg。该方法生产干扰素工艺简单，表达量高，生物活性高。
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公开(公告)号：CN107367608A
公开(公告)日：2017-11-21
申请号：CN201710697248.1
申请日：2017-08-15
申请人： 南京农业大学
IPC分类号： G01N33/535
CPC分类号： G01N33/535
摘要： 本发明涉及一种用于罗非鱼IgM检测的酶标抗体的制备方法，属于生物技术领域，采集罗非鱼血清，用Protein G亲和纯化得到罗非鱼IgM抗体，再将罗非鱼IgM抗体免疫新西兰大白兔，得到兔抗罗非鱼IgG抗体，通过辣根过氧化酶对兔抗罗非鱼IgG抗体进行标记得到酶标二抗。相对于现有技术，本发明的有益效果：本发明采用亲和层析的方法，制备高浓度的兔抗罗非鱼IgM的多克隆抗体，纯化后进行辣根过氧化物酶标记和标记后抗体浓度测定，效价大于1：128000，通过适当稀释用于免疫反应中，用于检测罗非鱼IgM，有助于罗非鱼链球菌病的规模化防控。
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公开(公告)号：CN101928711B
公开(公告)日：2013-04-10
申请号：CN201010125002.5
申请日：2010-03-16
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明涉及利用全基因合成技术获得鸡α干扰素基因及进行干扰素蛋白的原核表达，属于生物制药领域。包括对鸡α干扰素基因序列进行密码子的改造并全基因合成此序列，含鸡α干扰素基因的原核表达载体的构建，用所述含鸡α干扰素基因的原核表达载体转化大肠杆菌及诱导表达，蛋白提取及变性复性，及抗病毒活性的研究。试验所得干扰素能抵抗水疱性口炎病毒的攻击，比活性达到1.06×105U/mg。该方法生产干扰素工艺简单，表达量高，生物活性高。
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公开(公告)号：CN101870976B
公开(公告)日：2012-05-09
申请号：CN201010125041.5
申请日：2010-03-16
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明涉及利用全基因合成技术获得鸭α干扰素基因及进行干扰素蛋白的原核表达，属于生物制药领域。包括对鸭α干扰素基因序列进行密码子的改造并全基因合成此序列，含鸭α干扰素基因的原核表达载体的构建，用所述含鸭α干扰素基因的原核表达载体转化大肠杆菌及诱导表达，蛋白提取及变性复性，及抗病毒活性的研究。试验所得干扰素能抵抗水疱性口炎病毒的攻击，比活性达到5.6×103U/mg。该方法生产干扰素工艺简单，表达量高，生物活性高。
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公开(公告)号：CN101870976A
公开(公告)日：2010-10-27
申请号：CN201010125041.5
申请日：2010-03-16
申请人： 南京农业大学
摘要： 本发明涉及利用全基因合成技术获得鸭α干扰素基因及进行干扰素蛋白的原核表达，属于生物制药领域。包括对鸭α干扰素基因序列进行密码子的改造并全基因合成此序列，含鸭α干扰素基因的原核表达载体的构建，用所述含鸭α干扰素基因的原核表达载体转化大肠杆菌及诱导表达，蛋白提取及变性复性，及抗病毒活性的研究。试验所得干扰素能抵抗水疱性口炎病毒的攻击，比活性达到5.6×103U/mg。该方法生产干扰素工艺简单，表达量高，生物活性高。
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公开(公告)号：CN116004866A
公开(公告)日：2023-04-25
申请号：CN202211451472.X
申请日：2022-11-20
申请人： 南京农业大学
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , G01N33/558 , G01N33/58 , G01N33/569
摘要： 一种直接提取并扩增牛奶中无乳链球菌核酸的快速试纸条检测方法，采用高分子纤维素载体核酸提取法提取牛奶中的细菌核酸；以上述提取得到的细菌核酸为模板，进行MIRA扩增，得扩增产物；应用胶体金免疫层析试纸条进行扩增产物检测。本发明使核酸提取过程缩短为2 min。本发明将高分子纤维素提取、MIRA等温扩增、胶体金免疫层析试纸条结合，构建了直接检测牛奶中无乳链球菌的快速检测方法，实现了直接从牛奶中检测无乳链球菌，该检测发明仅耗时不到15 min,最低检测限为3.52×102 CFU/mL，具有检测时间短、成本低廉、灵敏度高、操作简便、无需实验室设备等特点，适合在条件有限的牧场进行检测。
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