公开(公告)号：CN114015698B

公开(公告)日：2023-08-22

申请号：CN202111521651.1

申请日：2021-12-13

申请人： 南京农业大学

发明人： 黄克和 ,  李好磊 ,  岳冬梅 ,  王孟孟 ,  何文淼 ,  刘丹丹 ,  陈兴祥 ,  甘芳 ,  刘云欢

IPC分类号： C12N15/12 ,  C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  A61K48/00 ,  A61K38/17 ,  A61P39/02 ,  A61P39/06 ,  C12R1/01 ,  A61K35/744

摘要： 本发明公开了一种表达热休克蛋白Hsp70的重组乳酸乳球菌及其制备方法和应用，通过PCR扩增Hsp70基因全序列并回收纯化，之后制备pNZ8149线性化载体，将两者进行同源重组连接反应，得到重组表达质粒pNZ8149‑Hsp70；制备感受态细胞，将重组表达质粒pNZ8149‑Hsp70通过电转化转入感受态细胞，制得高效表达Hsp70的重组乳酸乳球菌。本发明利用同源重组技术构建了重组Hsp70蛋白的乳酸菌表达体系，通过快速诱导可大量表达Hsp70，由于乳酸菌本身不含内毒素，因此无需进行蛋白纯化，可将诱导表达的蛋白连同菌液一同饲喂小鼠，然后再攻毒，经检测上述含Hsp70的菌液可减轻霉菌毒素对小鼠的伤害，对攻毒后的小鼠能起到很好的保护作用。

公开(公告)号：CN114015698A

公开(公告)日：2022-02-08

申请号：CN202111521651.1

申请日：2021-12-13

申请人： 南京农业大学

发明人： 黄克和 ,  李好磊 ,  岳冬梅 ,  王孟孟 ,  何文淼 ,  刘丹丹 ,  陈兴祥 ,  甘芳 ,  刘云欢

IPC分类号： C12N15/12 ,  C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  A61K48/00 ,  A61K38/17 ,  A61P39/02 ,  A61P39/06 ,  C12R1/01 ,  A61K35/744

摘要： 本发明公开了一种表达热休克蛋白Hsp70的重组乳酸乳球菌及其制备方法和应用，通过PCR扩增Hsp70基因全序列并回收纯化，之后制备pNZ8149线性化载体，将两者进行同源重组连接反应，得到重组表达质粒pNZ8149‑Hsp70；制备感受态细胞，将重组表达质粒pNZ8149‑Hsp70通过电转化转入感受态细胞，制得高效表达Hsp70的重组乳酸乳球菌。本发明利用同源重组技术构建了重组Hsp70蛋白的乳酸菌表达体系，通过快速诱导可大量表达Hsp70，由于乳酸菌本身不含内毒素，因此无需进行蛋白纯化，可将诱导表达的蛋白连同菌液一同饲喂小鼠，然后再攻毒，经检测上述含Hsp70的菌液可减轻霉菌毒素对小鼠的伤害，对攻毒后的小鼠能起到很好的保护作用。