公开(公告)号：CN116355874A

公开(公告)日：2023-06-30

申请号：CN202310138546.2

申请日：2023-02-20

申请人： 南京工业大学

发明人： 何冰芳 ,  徐晓丽 ,  储建林 ,  李玉婷 ,  陈璐娜 ,  王文文 ,  钦松 ,  吴斌 ,  高振

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12P19/60 ,  C12P19/18

摘要： 本发明涉及糖基转移酶突变体及其在制备槲皮素‑3‑O鼠李糖苷中的应用，通过将葡萄糖基转移酶AtUGT78D2氨基酸序列C‑端PSPG结构域的44个氨基酸替换为糖基转移酶AtUGT78D1的C‑端PSPG结构域的44个氨基酸，获得结构域工程改造的糖基转移酶AtUGT78D2‑D1PSPG；再将糖基转移酶AtUGT78D2‑D1PSPG进行定点突变，获取选择性好、稳定性好、表达量高的鼠李糖基转移酶突变体，本发明还提供了利用蔗糖合酶AtSuSy、UDP‑鼠李糖合成酶AtRHM‑NRS、糖基转移酶AtUGT78D2‑D1PSPG突变体构建的三酶偶联催化合成槲皮素‑3‑O‑鼠李糖苷的反应体系，实现了以蔗糖为底物，在UDP‑鼠李糖合成酶的作用下生成UDP‑鼠李糖供体，减少了UDP‑鼠李糖供体购买的生产成本，进而在糖基转移酶的作用下，催化槲皮素一步法定向合成槲皮素‑3‑O‑鼠李糖苷。