公开(公告)号：CN114934009A

公开(公告)日：2022-08-23

申请号：CN202210676412.1

申请日：2022-06-15

Applicant: 南通大学

Inventor： 陈浩 ,  聂骏宇 ,  乔枫 ,  叶梅

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明涉及一种培养液及分离和体外培养小鼠附睾上皮细胞的方法，方法步骤包括：获取成年小鼠附睾组织的不同区段，通过胰蛋白酶和胶原蛋白酶I消化获取细胞团，RPMI 1640细胞培养液重悬，接种于孔板中，并置于34℃的二氧化碳培养箱。培养1天后细胞开始贴壁，并且呈团状分布，3天后细胞汇集长满。免疫荧光染色方法鉴定上皮细胞标记蛋白E‑cadherin和主细胞的标记蛋白AQP‑9。传代0次以及传代1次的上皮细胞活率分别能够达到80％和95％以上，表明该培养体系能够维持并恢复细胞活率。本发明通过酶消化法可高效分离小鼠附睾不同区段上皮细胞，并进行体外培养，为研究上皮细胞的分子功能提供合适的细胞模型。

公开(公告)号：CN115957214A

公开(公告)日：2023-04-14

申请号：CN202211634432.9

申请日：2022-12-19

Applicant: 南通大学

Inventor： 赵秀玲 ,  曾旭辉 ,  聂骏宇 ,  毛志敏

IPC: A61K31/436 ,  C12N5/071 ,  A61P39/02 ,  A61P15/08

Abstract: 本发明公开了一种缓解细胞双酚A毒性的方法。发明人优化了这该细胞系中雷帕霉素的浓度，培养液中添加50nM的雷帕霉素可以显著改善双酚A的细胞毒性。该培养液以常规培养液为基础培养液，同时添加雷帕霉素和双酚A，研究表明添加50nM的雷帕霉素可以显著提高TM4细胞活性和增殖速度。因此，本发明极大地缓解了双酚A的生殖细胞毒性，在双酚A环境和职业暴露所致毒性的防治药物中，雷帕霉素具有潜在的应用价值，该作用可能对于双酚A导致的男性生殖功能的损伤及男性不育症的治疗有着重要的指导意义，可能开辟新的途径。

公开(公告)号：CN115807108A

公开(公告)日：2023-03-17

申请号：CN202211561881.5

申请日：2022-12-07

Applicant: 南通大学

Inventor： 聂骏宇 ,  陈浩 ,  姜婷 ,  张梦雅 ,  赵秀玲

IPC: C12Q1/6888 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及基于线粒体标记评估附睾精子的方法，步骤包括：选取成年的PHAMfloxed(♂)和DDX4cre的小鼠(♀)，连续交配后获得可能发生脱靶效应的mito‑Dendra2‑flox小鼠：(PHAMHOMO，DDX4)，(PHAMHET，DDX4)，(PHAMHET，‑)或(PHAMHOMO，‑)。随后获取鼠尾，利用荧光显微镜观察Dendra2荧光信号，判定小鼠表达Dendra2荧光蛋白的情况。选取已经进行线粒体标记(mito‑Dendra2)的雄性荧光小鼠与雌性荧光小鼠交配，能稳定获得线粒体标记的荧光小鼠。获取mito‑Dendra2小鼠的组织，通过组织切片观察，所有的组织中均有明亮的Dendra2荧光信号。并且，附睾不同区段来源的精子中段也有明亮的dendra2信号。上述结果表明这种繁育策略能获得全身标记线粒体的小鼠后代，并且能标记附睾精子线粒体，为在体或体外研究线粒体功能提供合适的动物模型。