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公开(公告)号：CN108333366A
公开(公告)日：2018-07-27
申请号：CN201810077848.2
申请日：2018-01-26
IPC分类号： G01N33/68 , G01N33/574
摘要： 本发明公开了一种高迁移率蛋白HMGB3在监测肝细胞恶性转化过程的应用，包括以下步骤：动物分组，模型制备，制作大鼠肝脏组织的石蜡切片，大鼠肝脏的H&E染色，Trizol法检测并计算大鼠肝癌形成动态过程中HMGB家族的mRNA表达水平，和免疫组化技术检测大鼠肝癌形成过程中HMGB3的蛋白表达水平。本发明构建了大鼠肝癌模型，以2-乙酰氨基芴诱发肝细胞恶性转化，通过RT-qPCR发现，分析肝癌形成的不同阶段HMGB家族成员mRNA水平，发现HMGB3表达在肝恶性转化过程中呈动态增长；并且免疫组化验证HMGB3蛋白水平在肝癌形成的过程中表达显著增高；由此可见HMGB3可以用于肝细胞恶性转化过程的动态监检。
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公开(公告)号：CN108333366B
公开(公告)日：2020-06-12
申请号：CN201810077848.2
申请日：2018-01-26
IPC分类号： G01N33/68 , G01N33/574
摘要： 本发明公开了一种高迁移率蛋白HMGB3在监测肝细胞恶性转化过程的应用，包括以下步骤：动物分组，模型制备，制作大鼠肝脏组织的石蜡切片，大鼠肝脏的H&E染色，Trizol法检测并计算大鼠肝癌形成动态过程中HMGB家族的mRNA表达水平，和免疫组化技术检测大鼠肝癌形成过程中HMGB3的蛋白表达水平。本发明构建了大鼠肝癌模型，以2‑乙酰氨基芴诱发肝细胞恶性转化，通过RT‑qPCR发现，分析肝癌形成的不同阶段HMGB家族成员mRNA水平，发现HMGB3表达在肝恶性转化过程中呈动态增长；并且免疫组化验证HMGB3蛋白水平在肝癌形成的过程中表达显著增高；由此可见HMGB3可以用于肝细胞恶性转化过程的动态监检。
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公开(公告)号：CN108004325A
公开(公告)日：2018-05-08
申请号：CN201810095877.1
申请日：2018-01-31
IPC分类号： C12Q1/6886 , G01N33/574
摘要： 本发明公开了一种CD44在监测非酒精性脂肪性肝病恶化转化过程中的应用，包括以下步骤：动物分组、模型构建、肝组织脂肪染色、血脂和肝酶活性测定、免疫组织化学染色和基因表达谱分析；通过以上步骤，本发明通过建立正常肝、脂肪肝、损伤变性肝、病变肝和癌变肝的大鼠模型，检测在肝细胞恶性转化过程中CD44变化，对照组肝组织含有极微量CD44表达，脂肪肝组的鼠肝组织中CD44表达量明显高于对照组；而变性组、病变组和癌变组的鼠肝组织中CD44表达量均显著高于脂肪肝组和对照组，其中癌变组的CD44表达量最高，癌变组的CD44表达量最高，肝组织中CD44的高表达对肝细胞恶化转化过程中起促进作用。
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公开(公告)号：CN103462948B
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201310312133.8
申请日：2013-07-24
申请人： 南通大学附属医院
发明人： 姚登福
IPC分类号： A61K31/205
摘要： 本发明公开了一种新型非酒精性脂肪肝病模型制备方法，包括以下步骤：a.将饲养小鼠随机分两组，第一组：模型小组：第二组：对照小鼠；每天记录状态并取尿液、肝组织及血液作脂质分析；b.处理实验对象；c.建立模型；d.肝组织与血液采集；e.将鼠肝组织标本进行常规冰冻切片，取材、普通胶水包冰冻切片、染色后封片；e.对模型小鼠常规进行病理检查；f.对对照小鼠常规进行病理检查；将f）和g）步骤中得出的动态分析肝组织脂肪进行对比。本发明建立的新型非酒精性脂肪肝病模型，路线合理，易操作，且针对性强，是进一步研究非酒精性脂肪肝的有效工具。
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公开(公告)号：CN106434752A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610413072.8
申请日：2016-06-14
申请人： 南通大学附属医院
IPC分类号： C12N15/867
CPC分类号： C12N15/86 , C12N2740/15043
摘要： 本发明公开了敲除Wnt3a基因的过程及其验证方法，经过构建针对Wnt3a基因的Cas9慢病毒载体、HepG2细胞的培养与传代、目的细胞慢病毒感染与筛选、错配酶法验证基因敲除效率、细胞蛋白分析、CCK-8法检测细胞增殖的步骤完成对Wnt3a基因的敲除及验证。本发明的优点在于：本发明通过首次构建Cas9双载体慢病毒系统敲除Wnt3a基因,Crispr/Cas9 是一种能够对任何物种基因组的特定位点进行精确编辑的技术，使用该技术能够进行细胞水平单基因或多基因敲除，该方法比其它基因编辑技术靶向精确性更高，RNA靶向序列和基因组序列必须完全匹配，Cas9才会对DNA进行剪切，并可实现对靶基因多个位点同时敲除，载体构建实验周期短，节省大量时间和成本，并且无物种限制。
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公开(公告)号：CN109880791B
公开(公告)日：2023-02-03
申请号：CN201910124700.4
申请日：2019-02-20
申请人： 南通大学附属医院
IPC分类号： C12N5/071
摘要： 本发明公开了一种肝纤维化类器官模型的体外构建方法，将肝细胞、肝星状细胞、枯否细胞及肝窦内皮细胞，混悬于培养基A；培养至第4天，换为培养基B维持培养；第10天开始，换为培养基C，连续培养六天。发明基于肝脏内细胞成分比例，快速构建大小结构均一、纤维化表征明显的3D肝脏纤维化类器官体外模型。本发明构建的肝脏纤维化类器官模型，原理明确，结构稳定，方法简易，构建迅速，可操作性强，适用于肝脏纤维化发生发展机制研究，抗纤维化药物高通量筛选等，具有产业化意义。
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公开(公告)号：CN110004109B
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN201910255261.0
申请日：2019-04-01
申请人： 南通大学附属医院
摘要： 本发明公开了一种肝癌类器官模型的体外构建方法，将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，按特定比例混悬于培养基A；培养至第4天，半量换液维持培养；第7天开始，换为培养基B，连续培养7天；第14天传代扩增培养。本发明基于肿瘤微环境中复杂的细胞构成，快速构建大小均一、结构稳定、可检测抗癌药物有效性，并可扩增培养的3D肝癌类器官体外模型。本发明构建的肝癌类器官模型方法简易，构建迅速，可操作性强，适用于研究肝癌发生发展机制、以及肝癌药物高通量筛选等，具有产业化意义。
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公开(公告)号：CN110004109A
公开(公告)日：2019-07-12
申请号：CN201910255261.0
申请日：2019-04-01
申请人： 南通大学附属医院
摘要： 本发明公开了一种肝癌类器官模型的体外构建方法，将肝癌细胞、肝星状细胞及肝窦内皮细胞，按特定比例混悬于培养基A；培养至第4天，半量换液维持培养；第7天开始，换为培养基B，连续培养7天；第14天传代扩增培养。本发明基于肿瘤微环境中复杂的细胞构成，快速构建大小均一、结构稳定、可检测抗癌药物有效性，并可扩增培养的3D肝癌类器官体外模型。本发明构建的肝癌类器官模型方法简易，构建迅速，可操作性强，适用于研究肝癌发生发展机制、以及肝癌药物高通量筛选等，具有产业化意义。
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公开(公告)号：CN103743902A
公开(公告)日：2014-04-23
申请号：CN201310601573.5
申请日：2013-11-25
申请人： 南通大学附属医院
IPC分类号： G01N33/574 , G01N33/535 , C12N15/85
CPC分类号： G01N33/5011 , C12N15/85
摘要： 本发明公开了一种检测沉默GPC-3基因转录抑制肝癌裸鼠移植瘤能力的方法。通过1）针对靶基因共有序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA,再合成相应dsDNA，将dsDNA插入载体构建4种重组质粒，并通过荧光定量PCR挑选出干扰效率最高的一种重组质粒；2）将上述干扰效率最高的重组质粒转染至HepG2细胞中构建转染HepG2细胞，并对其进行筛选，得到稳定转染HepG2细胞;3）将上述稳定转染HepG2细胞接种裸鼠皮下构建人肝癌细胞荷瘤裸鼠模型；4）而后测定上述稳定转染HepG2细胞在人肝癌细胞荷瘤裸鼠模型中生长情况。通过以上方法来检测沉默GPC-3基因转录抑制肝癌裸鼠移植瘤能力，可以用于GPC-3对移植瘤的研究。
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