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公开(公告)号:CN101684475A
公开(公告)日:2010-03-31
申请号:CN200910111908.9
申请日:2009-06-02
摘要: 重组毕赤酵母工程菌的构建及其应用,涉及一种微生物重组构建方法及应用。将杂合β-1,3-1,4-葡聚糖酶插入pPIC9K,构建出重组载体pPIC9K-bgl,然后将重组载体pPIC9K-bgl线性化导入巴斯德毕赤酵母,经筛选得一株最优重组菌株,命名为GS115/pPIC9K-bgl。所构建的毕赤酵母工程菌表达杂合β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力为1125IU/mL,蛋白表达量为1.22g/L。该酶具有酸碱稳定性、热稳定性好及催化pH范围广等优点,在酸性环境中的热稳定性大大高于单一的野生型β-葡聚糖酶,其最适反应pH为6.0,最适反应温度为50℃,具有较好的工业应用前景。
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公开(公告)号:CN101638666A
公开(公告)日:2010-02-03
申请号:CN200910039057.1
申请日:2009-04-28
申请人: 广州甘蔗糖业研究所
摘要: 本发明涉及基因工程领域和蛋白质的分泌表达领域,提出一种用于制造右旋糖酐酶的毕赤酵母工程菌株的构建方法,包括步骤:(1)设计寡核苷酸引物并以油脂酵母1390基因组DNA为模板;克隆得到右旋糖酐酶基因;(2)利用分泌表达载体pPIC9K,将右旋糖酐酶基因插入pPIC9K的多克隆位点(EcoRI和NotI),构建出整合分泌型表达载体pPIC9K-139;(3)对重组表达载体pPIC9K-139线性化,实现右旋糖酐酶的高效分泌表达,筛选得到重组毕赤酵母工程菌株GS115-139。本发明成功实现右旋糖酐酶基因在毕赤酵母中的有效表达,构建了能高效分泌表达右旋糖酐酶的工程菌株;实现右旋糖酐酶的发酵工艺放大。
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公开(公告)号:CN102268449A
公开(公告)日:2011-12-07
申请号:CN201110196987.5
申请日:2011-07-14
申请人: 广州甘蔗糖业研究所
摘要: 本发明公开了一种右旋糖酐酶的组成型表达工程菌株构建方法及其制备方法。组成型表达工程菌株的构建方法,包括步骤:(1)将得到的基因插入到表达载体pGAPZαA多克隆位点,构建重组质粒pGAPZαA-dex;(2)将重组质粒线性化转化到毕赤酵母KM71H,筛选出阳性克隆菌。将工程菌用于右旋糖酐酶的制备方法中。本发明成功地实现了右旋糖酐酶基因在毕赤酵母中的有效表达,并以廉价碳源为原料,在发酵过程中无需使用易燃易爆的甲醇,消除生产安全隐患,实现右旋糖酐酶的发酵工艺放大,最大限度地降低成本。
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