公开(公告)号：CN101684475A

公开(公告)日：2010-03-31

申请号：CN200910111908.9

申请日：2009-06-02

申请人： 厦门大学 ,  广州甘蔗糖业研究所

发明人： 卢英华 ,  陈龙军 ,  梁达奉 ,  郭亭 ,  敬科举

IPC分类号： C12N15/81 ,  C12N9/24 ,  C12R1/84

摘要： 重组毕赤酵母工程菌的构建及其应用，涉及一种微生物重组构建方法及应用。将杂合β-1，3-1，4-葡聚糖酶插入pPIC9K，构建出重组载体pPIC9K-bgl，然后将重组载体pPIC9K-bgl线性化导入巴斯德毕赤酵母，经筛选得一株最优重组菌株，命名为GS115/pPIC9K-bgl。所构建的毕赤酵母工程菌表达杂合β-1，3-1，4-葡聚糖酶活力为1125IU/mL，蛋白表达量为1.22g/L。该酶具有酸碱稳定性、热稳定性好及催化pH范围广等优点，在酸性环境中的热稳定性大大高于单一的野生型β-葡聚糖酶，其最适反应pH为6.0，最适反应温度为50℃，具有较好的工业应用前景。

公开(公告)号：CN101638666A

公开(公告)日：2010-02-03

申请号：CN200910039057.1

申请日：2009-04-28

申请人： 广州甘蔗糖业研究所

发明人： 梁达奉 ,  曾练强 ,  郭亭 ,  卢英华 ,  蚁细苗 ,  李雨虹 ,  陈龙军 ,  张远平 ,  黄玉南 ,  钟映萍 ,  敬科举

IPC分类号： C12N15/81 ,  C12N9/46 ,  C12R1/84

摘要： 本发明涉及基因工程领域和蛋白质的分泌表达领域，提出一种用于制造右旋糖酐酶的毕赤酵母工程菌株的构建方法，包括步骤：(1)设计寡核苷酸引物并以油脂酵母1390基因组DNA为模板；克隆得到右旋糖酐酶基因；(2)利用分泌表达载体pPIC9K，将右旋糖酐酶基因插入pPIC9K的多克隆位点(EcoRI和NotI)，构建出整合分泌型表达载体pPIC9K-139；(3)对重组表达载体pPIC9K-139线性化，实现右旋糖酐酶的高效分泌表达，筛选得到重组毕赤酵母工程菌株GS115-139。本发明成功实现右旋糖酐酶基因在毕赤酵母中的有效表达，构建了能高效分泌表达右旋糖酐酶的工程菌株；实现右旋糖酐酶的发酵工艺放大。