公开(公告)号：CN108179204A

公开(公告)日：2018-06-19

申请号：CN201711384960.2

申请日：2017-12-20

申请人： 吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心

发明人： 罗雁非 ,  聂丹丹 ,  丁旭 ,  王准 ,  肖建光 ,  曲辉 ,  吴连鹏 ,  孙玉 ,  彭勃

IPC分类号： C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/10 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种蔬菜中肠出血性大肠埃希氏菌PCR检测方法，尤其涉及一种优化的微滴数字PCR检测反应体系。所述的微滴数字PCR检测方法包括以下步骤：a.制备样品和增菌培养；b.提取细菌模板DNA；c.以提取的DNA为模板，加入上述的引物和带荧光染料的探针以及酶反应液进行实时荧光PCR反应，所述的反应结束后，检测所有微滴的荧光信号值并设定阈值，根据荧光信号的阈值确定微滴是否包裹模板DNA，高于阈值的微滴包裹模板DNA，为阳性微滴，低于阈值的微滴不包裹模板DNA为阴性微滴，本发明提供的检测方法工作流程简单，又兼具实时荧光定量PCR方法的优点，可实现核酸绝对定量分析，并且又具有高通量样品处理能力，实用性强。