公开(公告)号：CN1186119A

公开(公告)日：1998-07-01

申请号：CN96114273.1

申请日：1996-12-25

申请人： 吴海燕 ,  史江 ,  黄文华

发明人： 史江 ,  黄文华 ,  吴海燕 ,  吴钢 ,  胡云龙

IPC分类号： C12N15/07

摘要： 本发明公开了一种采用基团工程的方法,大量获得人血小板生成素(rhTPO)及其制剂的生产工艺。在宿主细胞扩增培养阶段,细胞接种量为1.5×104/cm2—2.5×104/cm2,小牛血清含量为8—10%,细胞贴壁时间缩短至72小时以下长成单层,单层细胞停留时间延长至20—24天,使CHO细胞对TPO的分泌表达量提高,从而大大提高了TPO的得率。对培养所得物分离纯化rhTPO是按“阴离子交换层析—疏水层析—分子筛凝胶层析”三步骤进行的。简化了分离纯化工艺,缩短了分离纯化时间,避免了目的蛋白在极性条件下的作用,增加了TPO的稳定性。终产品的得率从常规方法的30%左右提高到45%左右。使用本方法生产的TPO终产品,加入适量人血清白蛋白作保护剂,再加入1%甘露醇配制成注射液,可以用于治疗各种原因引起的血小板减少症。

公开(公告)号：CN1058992C

公开(公告)日：2000-11-29

申请号：CN96114273.1

申请日：1996-12-25

申请人： 史江 ,  吴海燕

发明人： 史江 ,  黄文华 ,  吴海燕 ,  吴钢 ,  胡云龙

IPC分类号： C12N15/07

摘要： 本发明公开了一种采用基因工程的方法，大量获得人血小板生成素(rhTPO)及其制剂的生产工艺。在宿主细胞扩增培养阶段，细胞接种量为1.5×104/cm2-2.5×104/cm2，小牛血清含量为8-10%，细胞贴壁时间缩短至72小时以下长成单层，单层细胞停留时间延长至20-24天，使CHO细胞对TPO的分泌表达量提高，从而大大提高了TPO的得率。对培养所得物分离纯化rhTPO是按“阴离子交换层析-疏水层析-分子筛凝胶层析”三步骤进行的。简化了分离纯化工艺，缩短了分离纯化时间，避免了目的蛋白在极性条件下的作用，增加了TPO的稳定性。终产品的得率从常规方法的30%左右提高到45%左右。使用本方法生产的TPO终产品，加入适量人血清白蛋白作保护剂，再加入1%甘露醇配制成注射液，可以用于治疗各种原因引起的血小板减少症。