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公开(公告)号：CN111856031A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010704372.8
申请日：2020-07-21
申请人： 国家烟草质量监督检验中心
IPC分类号： G01N33/68 , A01K67/027
摘要： 本发明公开了一种通过测定外周血中性粒细胞中蛋白的表达来鉴定烟碱暴露的潜在生物标志物的方法，所述方法包括：基于条件性位置偏爱(CPP)装置建立大鼠烟碱CPP获得模型，最终获得无烟碱摄入大鼠和烟碱依赖大鼠；分别从获得的两组大鼠中提取外周血，提取外周血中性粒细胞的总蛋白；通过Western Blotting分别检测获得的两组总蛋白中特定蛋白的表达；通过统计学分析检测得到的特定蛋白的表达在两组之间是否具有显著性差异，当具有显著性差异时，所述蛋白被鉴定为烟碱暴露的潜在生物标志物。本方法可模拟吸烟依赖和不吸烟的两种吸烟状态，对外周血中性粒细胞中蛋白水平进行测定，对于烟碱暴露生物标志物的相关研究具有较高应用价值。
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公开(公告)号：CN107064481B
公开(公告)日：2019-07-23
申请号：CN201710156524.3
申请日：2017-03-16
申请人： 国家烟草质量监督检验中心 , 中国科学院合肥物质科学研究院
IPC分类号： G01N33/50
摘要： 本发明公开了一种气‑液界面暴露系统联合高内涵技术定量检测一氧化碳致细胞DNA损伤的方法，所示方法包括以下步骤：1)细胞培养，2)通过气‑液界面暴露方式的一氧化碳染毒，3)γH2AX的免疫荧光标记，4)高内涵检测。本发明的优点在于：采用体外气‑液界面暴露方式实现了气态一氧化碳在体外对贴壁细胞的高效染毒，提高了一氧化碳的染毒效率；利用高内涵成像系统自动成像，定量分析一氧化碳诱导产生的DNA双链断裂标志物γH2AX蛋白质，实现了细胞的直接、快速检测，使得样本处理更为方便；高分辨率的成像，不仅使γH2AX在细胞核内的分布可直接观测而且使图像资料便于存储和再分析，并且可以实现对一氧化碳在每个细胞核内诱导的γH2AX进行定量分析，检测结果更为灵敏和准确。
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公开(公告)号：CN107064087A
公开(公告)日：2017-08-18
申请号：CN201710156645.8
申请日：2017-03-16
申请人： 国家烟草质量监督检验中心 , 中国科学院合肥物质科学研究院
IPC分类号： G01N21/64
摘要： 本发明公开了一种基于高内涵技术定量分析苯或苯的代谢物致细胞DNA损伤的方法，所示方法包括以下步骤：1)细胞培养，2)细胞染毒，3)γH2AX的免疫荧光标记，4)高内涵技术定量分析。本发明的优点在于：利用高内涵成像系统自动成像，定量分析苯或苯的代谢物诱导产生的DNA双链断裂标志物γH2AX蛋白质，实现了细胞的直接、快速检测，使得样本处理更为方便；高分辨率的成像，不仅使γH2AX在细胞核内的分布可直接观测而且使图像资料便于存储和再分析，并且可以实现对苯或苯的代谢物在每个细胞核内诱导的γH2AX进行定量分析，检测结果更为灵敏和准确。
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![一种基于高内涵技术定量分析苯并[a]芘致细胞DNA损伤的方法](/CN/2017/1/31/images/201710156633.jpg)
公开(公告)号：CN107064086A
公开(公告)日：2017-08-18
申请号：CN201710156633.5
申请日：2017-03-16
申请人： 国家烟草质量监督检验中心 , 中国科学院合肥物质科学研究院
IPC分类号： G01N21/64
摘要： 本发明公开了一种基于高内涵技术定量分析苯并[a]芘致细胞DNA损伤的方法，所示方法包括以下步骤：1)细胞培养，2)细胞染毒，3)γH2AX的免疫荧光标记，4)高内涵技术定量分析。本发明的优点在于：利用高内涵成像系统自动成像，定量分析苯并[a]芘诱导产生的DNA双链断裂标志物γH2AX蛋白质，实现了细胞的直接、快速检测，使得样本处理更为方便；高分辨率的成像，不仅使γH2AX在细胞核内的分布可直接观测而且使图像资料便于存储和再分析，并且可以实现对苯并[a]芘在每个细胞核内诱导的γH2AX进行定量分析，检测结果更为灵敏和准确。
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公开(公告)号：CN106979939A
公开(公告)日：2017-07-25
申请号：CN201710156803.X
申请日：2017-03-16
申请人： 国家烟草质量监督检验中心 , 中国科学院合肥物质科学研究院
IPC分类号： G01N21/64
摘要： 本发明公开了一种基于高内涵技术定量分析亚硝胺或亚硝胺代谢物致细胞DNA损伤的方法，所示方法包括以下步骤：1)细胞培养，2)细胞染毒，3)γH2AX的免疫荧光标记，4)高内涵技术定量分析。本发明的优点在于：利用高内涵成像系统自动成像，定量分析亚硝胺或亚硝胺代谢物诱导产生的DNA双链断裂标志物γH2AX蛋白质，实现了细胞的直接、快速检测，使得样本处理更为方便；高分辨率的成像，不仅使γH2AX在细胞核内的分布可直接观测而且使图像资料便于存储和再分析，并且可以实现对亚硝胺或亚硝胺代谢物在每个细胞核内诱导的γH2AX进行定量分析，检测结果更为灵敏和准确。
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公开(公告)号：CN106970051A
公开(公告)日：2017-07-21
申请号：CN201710156635.4
申请日：2017-03-16
申请人： 国家烟草质量监督检验中心 , 中国科学院合肥物质科学研究院
IPC分类号： G01N21/64
摘要： 本发明公开了一种基于高内涵技术定量分析焦油致细胞DNA损伤的方法，所示方法包括以下步骤：1)细胞培养，2)细胞染毒，3)γH2AX的免疫荧光标记，4)高内涵技术定量分析。本发明的优点在于：利用高内涵成像系统自动成像，定量分析焦油诱导产生的DNA双链断裂标志物γH2AX蛋白质，实现了细胞的直接、快速检测，使得样本处理更为方便；高分辨率的成像，不仅使γH2AX在细胞核内的分布可直接观测而且使图像资料便于存储和再分析，并且可以实现对焦油在每个细胞核内诱导的γH2AX进行定量分析，检测结果更为灵敏和准确。
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公开(公告)号：CN105628848A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610226337.3
申请日：2016-04-13
申请人： 国家烟草质量监督检验中心
IPC分类号： G01N30/88
CPC分类号： G01N30/88 , G01N2030/8813
摘要： 一种同时测定唾液中6种醛类-DNA加合物的方法，即唾液中HOMe-dA、HOMe-dG、Ethylidene-dG、CdG、α-Acr-dG和γ-Acr-dG的测定方法，包括采用OG-500唾液采集管收集唾液，对唾液进行DNA提取，DNA溶液进行酶水解并依次加入稳定同位素内标、还原剂NaBH3CN和DNA水解酶。水解液经Strata-X小柱固相萃取，收集洗脱液，室温下氮吹至干，复溶于甲醇水溶液，引入LC-MS/MS系统分析，可准确检测出上述六种物质的含量水平。采用稳定同位素作为内标定量分析物可以减少样品前处理过程中引起的误差，串联质谱法更好的提高了方法的选择性、准确性和灵敏度。通过色谱柱以及洗脱条件的选择与优化，较好的提高了色谱分离过程，缩短了分析时间，减少了溶剂消耗。
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公开(公告)号：CN107121553B
公开(公告)日：2019-08-27
申请号：CN201710156546.X
申请日：2017-03-16
申请人： 国家烟草质量监督检验中心 , 中国科学院合肥物质科学研究院
摘要： 本发明公开了一种气‑液界面暴露系统联合高内涵技术定量检测1,3‑丁二烯致细胞DNA损伤的方法，所示方法包括以下步骤：1)细胞培养，2)通过气‑液界面暴露方式的1,3‑丁二烯染毒，3)γH2AX的免疫荧光标记，4)高内涵检测。本发明的优点在于：采用体外气‑液界面暴露方式实现了气态1,3‑丁二烯在体外对贴壁细胞的高效染毒，提高了1,3‑丁二烯的染毒效率；利用高内涵成像系统自动成像，定量分析1,3‑丁二烯诱导产生的DNA双链断裂标志物γH2AX蛋白质，实现了细胞的直接、快速检测，使得样本处理更为方便；高分辨率的成像，不仅使γH2AX在细胞核内的分布可直接观测而且使图像资料便于存储和再分析，并且可以实现对1,3‑丁二烯在每个细胞核内诱导的γH2AX进行定量分析，检测结果更为灵敏和准确。
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公开(公告)号：CN107132344A
公开(公告)日：2017-09-05
申请号：CN201710156834.5
申请日：2017-03-16
申请人： 国家烟草质量监督检验中心 , 中国科学院合肥物质科学研究院
CPC分类号： G01N33/5014 , G01N21/6428 , G01N33/6842
摘要： 本发明公开了一种基于高内涵技术定量分析醛类物质致细胞DNA损伤的方法，所示方法包括以下步骤：1)细胞培养，2)细胞染毒，3)γH2AX的免疫荧光标记，4)高内涵技术定量分析。本发明的优点在于：利用高内涵成像系统自动成像，定量分析醛类物质诱导产生的DNA双链断裂标志物γH2AX蛋白质，实现了细胞的直接、快速检测，使得样本处理更为方便；高分辨率的成像，不仅使γH2AX在细胞核内的分布可直接观测而且使图像资料便于存储和再分析，并且可以实现对醛类物质在每个细胞核内诱导的γH2AX进行定量分析，检测结果更为灵敏和准确。
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公开(公告)号：CN105911167A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610227444.8
申请日：2016-04-13
申请人： 国家烟草质量监督检验中心
IPC分类号： G01N30/02
CPC分类号： G01N30/02 , G01N2030/027
摘要： 一种唾液中丙烯醛?DNA加合物的测定方法，即α?Acr?dG和γ?Acr?dG的测定方法，包括采用OG?500唾液采集管收集唾液，对唾液进行DNA提取，DNA溶液进行酶水解并依次加入稳定同位素内标和DNA水解酶。水解液经Strata?X小柱固相萃取，收集洗脱液，室温下氮吹至干，复溶于100μL的30%甲醇水溶液，引入LC?MS/MS系统分析，可准确检测出α?Acr?dG和γ?Acr?dG的含量水平。本发明采用稳定同位素作为内标定量分析物可以减少样品前处理过程中引起的误差，串联质谱法更好的提高了方法的选择性、准确性和灵敏度。通过色谱柱以及洗脱条件的选择与优化，较好的提高了目标物的分离度。
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