公开(公告)号：CN103436619A

公开(公告)日：2013-12-11

申请号：CN201310378688.2

申请日：2013-08-27

Applicant: 塔里木大学

Inventor： 喻华英 ,  石长青 ,  焦海宏 ,  任敏

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/10

Abstract: 本发明公开了一种犊牛腹泻病中鉴定非典型性大肠杆菌的方法，步骤包括：犊牛发生腹泻后病料的采集与标记；细菌的增菌，细菌的鉴定和选择性特殊培养基培养，菌体的处理；设计两对诊断性引物eaeA，P1：5’-CTGAACGGCGATTACGCGAA-3’，P2：5’-CCAGACGATACGATCCAG-3’，预期扩增出的目的片段大小，bfpA基因P1：5’-TGTATATTGGGCAGACC-3’，P2：5’-CAGGGCGTATTATGTAGA-3’，预期扩增出的目的片段大小；PCR扩增反应；记录革兰氏染色镜检结果，大肠杆菌在麦康凯琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板生长结果，毒力基因eaeAPCR结果；将eaeA所测序列与GeneBank中的序列进行比对，对eae序列进行分析，对核苷酸序列分析；将蛋白序列在NCBI中进行比对，得到该蛋白的结构域。本发明结合传统大肠杆菌的选择性特殊培养对样品进行初步纯化，获得单菌落，可提高PCR检测的准确性，可行性强。

公开(公告)号：CN103602723A

公开(公告)日：2014-02-26

申请号：CN201310353877.4

申请日：2013-08-14

Applicant: 塔里木大学

Inventor： 喻华英 ,  焦海宏

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  G01N21/31 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12Q1/686 ,  C12Q2531/113

Abstract: 本发明公开了一种筛选大肠杆菌生物膜毒力基因的方法,该方法包括以下步骤：准备筛选大肠杆菌生物膜毒力基因的材料；生物膜-96孔板微量法测定大肠杆菌生物膜；筛选大肠杆菌生物膜毒力基因；记录大肠杆菌形成生物膜检测-96孔微量板法的结果、目的基因fimH、KpsMTII、chuA、fliCPCR扩增结果、毒力基因筛选结果；统计检测大肠杆菌生物膜毒力基因的分布。本方法利用PCR聚合酶链式反应，对25株大肠杆菌阳性菌株菌进行毒力因子fimH、KpsMTII、chuA、fliC、yja和PapC的检测筛选，本发明通过确定大肠杆菌形成生物膜毒力基因的分布情况，为大肠杆菌生物膜的形成机理提供重要的理论依据。