公开(公告)号：CN114058588A

公开(公告)日：2022-02-18

申请号：CN202111342228.5

申请日：2021-11-12

Applicant: 复旦大学附属中山医院

Inventor： 钟芸诗 ,  程亦榕 ,  时强 ,  陈章涵 ,  徐小雅 ,  周平红 ,  李冰

IPC: C12N5/09 ,  C12N5/071

Abstract: 本发明涉及一种人源性肠腺瘤类器官的制备方法，包括以下步骤：(1)获取人肠腺瘤组织；(2)使用双抗‑PBS清洗人肠腺瘤组织4‑5次；(3)切碎组织，使用消化液消化，至看不见大块组织；(4)过滤纤维组织，进一步使用移液枪打散组织，并离心；(5)弃上清，离心；(6)弃上清后，使用PBS重悬组织，离心；(7)弃上清后加入适量的基质胶，重悬组织，加入孔板中；(8)待基质胶凝固后，加入培养基和Y27632，于培养箱中培养。本发明通过增加双抗PBS清洗步骤，减少了由于肠道细菌引起的类器官污染的可能性；通过吹打消化，使组织尽量消化为碎片，增加组织的利用效率，减少了所需的组织大小，增加了组织获取的便捷性。

公开(公告)号：CN114107388A

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202111340984.4

申请日：2021-11-12

Applicant: 复旦大学附属中山医院

Inventor： 程亦榕 ,  徐小雅 ,  时强 ,  陈章涵 ,  钟芸诗 ,  周平红 ,  李冰

IPC: C12N15/861 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及一种腺病毒转染类器官的方法，包括以下步骤：消化：对类器官进行消化处理；转染：消化处理后的类器官中加入腺病毒的病毒液，孵育；培养：孵育后的类器官离心分离后，进行培养，得到腺病毒转染的类器官。与现有技术相比，本发明方法不需要细胞因子的加入，降低了转染成本；本发明方法可以使用腺病毒转染，可转染的片段长度更长；本发明方法无需购置额外的设备，可运用普通的冰冻离心机和培养箱完成转染。

公开(公告)号：CN114107208A

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202111342231.7

申请日：2021-11-12

Applicant: 复旦大学附属中山医院

Inventor： 周平红 ,  程亦榕 ,  时强 ,  陈章涵 ,  徐小雅 ,  钟芸诗 ,  李冰

IPC: C12N5/09 ,  C12Q1/6869

Abstract: 本发明涉及一种人源性类器官库的制备方法，包括以下步骤：获取标本，将标本分为测序部分以及培养部分；标本的测序部分放入RNA保存液中，进行全基因组测序，并根据目标基因进行分类；标本的培养部分进行类器官培养；类器官培养时依据类器官生长情况，每2‑3天换液一次，每4‑6天传代一次，传代时一半以1:2的比例进行传代，一半进行冻存；将每一代冻存的类器官进行编号分类存放，直至第八代时冻存全部类器官。本发明通过测序的方法对类器官进行分类。可以依据不同种类类器官不同目标基因进行分类，对不同部位不同种类的类器官都十分适用。通过冻存、复苏类器官可以及时获取各个标本在不同时期的类器官模型，对基础实验和药筛都有可选择的空间。