公开(公告)号：CN118360304A

公开(公告)日：2024-07-19

申请号：CN202410540059.3

申请日：2024-04-30

申请人： 大连大学

发明人： 丁宁 ,  高玉亭 ,  胡学军 ,  宋钇潼 ,  吴宇航 ,  吴琼 ,  张小梅 ,  郑洋

IPC分类号： C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N15/52 ,  C12N1/21 ,  C12P21/00 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种表达N‑糖基化重组蛋白的工程菌株及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明将四糖合成基因与pEcgRNA‑N20质粒共同转入含有pEcCas质粒的大肠埃希菌感受态细胞中，挑取阳性单克隆，消除仅含有pEcgRNA‑N20质粒和pEcCas质粒的重组菌，得到重组工程菌，本发明的构建方法简单易行、效率高，所得到的重组工程菌株W3110删除lacZ位点同时整合入lsgCDEF基因簇以构建类人源化四糖链合成代谢途径，转入了携带糖基化受体蛋白基因的质粒，可用于N‑糖基化重组蛋白的表达。该方法可在大肠埃希菌体内快速实施，稳定性好，为其他模块化途径提供了技术平台。