公开(公告)号：CN118480563A

公开(公告)日：2024-08-13

申请号：CN202410641682.8

申请日：2024-05-22

申请人： 天津大学

发明人： 蒋建兰 ,  李国瑞 ,  冯佳 ,  葛平博 ,  周见庭 ,  柴玉婕

IPC分类号： C12N15/74 ,  C12N1/21 ,  C12R1/01

摘要： 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及大型质粒转化蓝藻的方法。本发明对鲍氏织线藻FACHB‑240电穿孔转化的蓝藻的条件进行了优化，确定了最优转化条件：电压为2.0kV~2.5kV，DNA转化量为4~10μg，电穿孔时间常数为3.6~5.0 ms，在此条件下成功将超过36kb的噬藻体基因组质粒一步电转化至鲍氏织线藻FACHB‑240细胞中。

公开(公告)号：CN117821254A

公开(公告)日：2024-04-05

申请号：CN202311862787.8

申请日：2023-12-30

申请人： 天津大学合成生物前沿研究院

发明人： 元英进 ,  刘悦 ,  周见庭

IPC分类号： C12N1/06 ,  C12N15/10

摘要： 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及用于提取酵母细胞核的裂解液及提取方法。该裂解液包括PVP、EDTA、K+盐、蛋白酶抑制剂、DNase抑制剂、多胺类化合物和水；所述多胺化合物包括精胺和亚精胺。实验结果表明，本发明裂解液及提取方法能够在体外分离出高纯度的酿酒酵母细胞核，核内染色体DNA没有被降解、且核内的染色体仍维持了高级结构。

公开(公告)号：CN112501191B

公开(公告)日：2023-09-26

申请号：CN202011116869.4

申请日：2020-10-19

申请人： 天津大学

发明人： 元英进 ,  周见庭

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65 ,  C12N15/55 ,  C12N15/10

摘要： 本发明涉及生物技术领域，特别涉及用于DNA循环迭代组装的系统及方法。本发明的循环迭代策略采用四个供体质粒循环利用，采用四个Cas9切割位点和两个筛选标记的设计；本发明中Cas9基因、λRed系统、telN基因是采用质粒形式实现，Cas9基因、λRed系统、telN基因整合到大肠杆菌基因组上可以的达到同样DNA组装的效果。该方法一方面不需要对DNA进行繁琐的体外抽提、酶切、回收等操作，另一方面避免传统大片段DNA组装需要制做原生质体等感受态细胞过程，具有操作简单自动化程度高、成本低等优点。该方法连续组装4轮后，5个DNA片段的组装阳性率可达98.4％，具有DNA组装阳性率高的优点。

公开(公告)号：CN113355338B

公开(公告)日：2023-04-28

申请号：CN202110620674.1

申请日：2021-06-03

申请人： 天津大学

发明人： 元英进 ,  崔有志 ,  李炳志 ,  周见庭

IPC分类号： C12N15/63 ,  C12N15/10

摘要： 本发明涉及靶向克隆技术领域，特别涉及一种基于线性质粒载体从基因组文库中靶向克隆目标片段的方法。包括：带有tos的环形质粒通过PCR扩增方式，在体外扩增并使用TelN原端粒酶酶切获得线性化的克隆载体同时，在载体两端引入与目标基因组片段侧翼相同的序列，得到高浓度线性化载体；将线性化载体与基因组文库进行体外组装，得到组装产物；在宿主基因中整合入TelN蛋白表达基因，得到整合有TelN蛋白的宿主；将组装产物转入整合有TelN蛋白的宿主中，筛选目标片段。本发明技术具有高效、靶向性强、低成本、大容量、易操作等特点。基于该发明能实现对基因组大片段的高效率一步克隆，实现最大156kb长度基因组序列的克隆。

公开(公告)号：CN113355338A

公开(公告)日：2021-09-07

申请号：CN202110620674.1

申请日：2021-06-03

申请人： 天津大学

发明人： 元英进 ,  崔有志 ,  李炳志 ,  周见庭

IPC分类号： C12N15/63 ,  C12N15/10

摘要： 本发明涉及靶向克隆技术领域，特别涉及一种基于线性质粒载体从基因组文库中靶向克隆目标片段的方法。包括：带有tos的环形质粒通过PCR扩增方式，在体外扩增并使用TelN原端粒酶酶切获得线性化的克隆载体同时，在载体两端引入与目标基因组片段侧翼相同的序列，得到高浓度线性化载体；将线性化载体与基因组文库进行体外组装，得到组装产物；在宿主基因中整合入TelN蛋白表达基因，得到整合有TelN蛋白的宿主；将组装产物转入整合有TelN蛋白的宿主中，筛选目标片段。本发明技术具有高效、靶向性强、低成本、大容量、易操作等特点。基于该发明能实现对基因组大片段的高效率一步克隆，实现最大156kb长度基因组序列的克隆。

公开(公告)号：CN112501191A

公开(公告)日：2021-03-16

申请号：CN202011116869.4

申请日：2020-10-19

申请人： 天津大学

发明人： 元英进 ,  周见庭

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65 ,  C12N15/55 ,  C12N15/10

摘要： 本发明涉及生物技术领域，特别涉及用于DNA循环迭代组装的系统及方法。本发明的循环迭代策略采用四个供体质粒循环利用，采用四个Cas9切割位点和两个筛选标记的设计；本发明中Cas9基因、λRed系统、telN基因是采用质粒形式实现，Cas9基因、λRed系统、telN基因整合到大肠杆菌基因组上可以的达到同样DNA组装的效果。该方法一方面不需要对DNA进行繁琐的体外抽提、酶切、回收等操作，另一方面避免传统大片段DNA组装需要制做原生质体等感受态细胞过程，具有操作简单自动化程度高、成本低等优点。该方法连续组装4轮后，5个DNA片段的组装阳性率可达98.4％，具有DNA组装阳性率高的优点。