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公开(公告)号：CN106497963B
公开(公告)日：2019-09-06
申请号：CN201610912165.5
申请日：2016-10-20
申请人： 天津大学
IPC分类号： C12N15/81 , C12N1/19 , A62D3/02 , C12R1/84 , A62D101/28
摘要： 本发明公开了细胞表面共展示PET分解酶和疏水蛋白的重组毕赤酵母，构建为：(1)从毕赤酵母基因组中克隆出锚定蛋白基因；化学合成疏水蛋白基因和PETase基因；(2)锚定蛋白基因和PETase基因连接得融合序列1；锚定蛋白基因和疏水蛋白基因连接得融合序列2；(3)将融合序列1连接到毕赤酵母表达载体上，得到融合表达载体1；将融合序列2连接到毕赤酵母表达载体上，得到融合表达载体2；(4)融合表达载体1、2转入表达宿主毕赤酵母中，得到本发明的重组毕赤酵母。本发明使酶固着定位于细胞表面。与游离酶相比具有稳定性高、易回收、反复使用、成本低，疏水蛋白与PETase在毕赤酵母中共展示增强重组毕赤酵母的稳定性。
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公开(公告)号：CN106497964A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201610912589.1
申请日：2016-10-20
申请人： 天津大学
IPC分类号： C12N15/81 , C12N1/19 , A62D3/02 , C12R1/84 , A62D101/28
摘要： 本发明公开了细胞表面展示PET分解酶的重组毕赤酵母及构建与应用，其构建为：(1)化学合成SEQ ID No.1所示的改良过的PET分解酶的核苷酸序列；从毕赤酵母GS115基因组中克隆出锚定蛋白基因的核苷酸序列；(2)利用OverlapPCR将锚定蛋白基因的核苷酸序列和改良过的PET分解酶基因的核苷酸序列连接得到融合序列；(3)将融合序列连接到毕赤酵母表达载体上，得到重组表达载体；(4)将重组表达载体转入宿主毕赤酵母中，得到细胞表面展示PET分解酶的重组毕赤酵母。本发明可以将PET分解酶锚定到细胞表面，固定化后的酶可做全细胞催化剂，相比于野生型稳定性高、回收方便、易控制、可反复利用。
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公开(公告)号：CN106497964B
公开(公告)日：2019-09-10
申请号：CN201610912589.1
申请日：2016-10-20
申请人： 天津大学
IPC分类号： C12N15/81 , C12N1/19 , A62D3/02 , C12R1/84 , A62D101/28
摘要： 本发明公开了细胞表面展示PET分解酶的重组毕赤酵母及构建与应用，其构建为：(1)化学合成SEQ ID No.1所示的改良过的PET分解酶的核苷酸序列；从毕赤酵母GS115基因组中克隆出锚定蛋白基因的核苷酸序列；(2)利用OverlapPCR将锚定蛋白基因的核苷酸序列和改良过的PET分解酶基因的核苷酸序列连接得到融合序列；(3)将融合序列连接到毕赤酵母表达载体上，得到重组表达载体；(4)将重组表达载体转入宿主毕赤酵母中，得到细胞表面展示PET分解酶的重组毕赤酵母。本发明可以将PET分解酶锚定到细胞表面，固定化后的酶可做全细胞催化剂，相比于野生型稳定性高、回收方便、易控制、可反复利用。
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公开(公告)号：CN106497963A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201610912165.5
申请日：2016-10-20
申请人： 天津大学
IPC分类号： C12N15/81 , C12N1/19 , A62D3/02 , C12R1/84 , A62D101/28
摘要： 本发明公开了细胞表面共展示PET分解酶和疏水蛋白的重组毕赤酵母，构建为：(1)从毕赤酵母基因组中克隆出锚定蛋白基因；化学合成疏水蛋白基因和PETase基因；(2)锚定蛋白基因和PETase基因连接得融合序列1；锚定蛋白基因和疏水蛋白基因连接得融合序列2；(3)将融合序列1连接到毕赤酵母表达载体上，得到融合表达载体1；将融合序列2连接到毕赤酵母表达载体上，得到融合表达载体2；(4)融合表达载体1、2转入表达宿主毕赤酵母中，得到本发明的重组毕赤酵母。本发明使酶固着定位于细胞表面。与游离酶相比具有稳定性高、易回收、反复使用、成本低，疏水蛋白与PETase在毕赤酵母中共展示增强重组毕赤酵母的稳定性。
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