一种标准化、高精度、通用的功能模块构建方法

    公开(公告)号:CN104419716B

    公开(公告)日:2017-12-29

    申请号:CN201310377238.1

    申请日:2013-08-27

    申请人: 天津大学

    IPC分类号: C12N15/66 C12N15/63 C12N1/19

    摘要: 本发明公开了一种标准化、高精度、通用的功能模块构建方法,包括如下步骤:(1)将源基因添加标准化位点形成基因元件,将基因元件连入质粒pLD‑Blunt中形成带有基因元件的质粒,进行序列验证;(2)从带有基因元件的质粒中调取基因元件,连入模块工具质粒中的如下缺口:终止子1‑启动子‑AATG‑缺口‑TAAA‑终止子2;构建出不同的功能模块的质粒;(3)从不同的功能模块的质粒中调取不同的功能模块,与经过酶切的酵母质粒载体共转化酿酒酵母,构建出标准化、高精度、通用的功能模块,存放于质粒中;本发明具有通用性、标准化、高精度、自由选择性。

    一种标准化、高精度、通用的功能模块构建方法

    公开(公告)号:CN104419716A

    公开(公告)日:2015-03-18

    申请号:CN201310377238.1

    申请日:2013-08-27

    申请人: 天津大学

    IPC分类号: C12N15/66 C12N15/63 C12N1/19

    摘要: 本发明公开了一种标准化、高精度、通用的功能模块构建方法,包括如下步骤:(1)将源基因添加标准化位点形成基因元件,将基因元件连入质粒pLD-Blunt中形成带有基因元件的质粒,进行序列验证;(2)从带有基因元件的质粒中调取基因元件,连入模块工具质粒中的如下缺口:终止子1-启动子-AATG-缺口-TAAA-终止子2;构建出不同的功能模块的质粒;(3)从不同的功能模块的质粒中调取不同的功能模块,与经过酶切的酵母质粒载体共转化酿酒酵母,构建出标准化、高精度、通用的功能模块,存放于质粒中;本发明具有通用性、标准化、高精度、自由选择性。

    一种分析维生素C生产菌株传代过程磷脂组变化的方法

    公开(公告)号:CN102586386A

    公开(公告)日:2012-07-18

    申请号:CN201210044060.4

    申请日:2012-02-24

    申请人: 天津大学

    摘要: 本发明公开了一种分析维生素C生产菌株传代过程磷脂组变化的方法,包括如下步骤:(1)固体培养:取氧化葡糖杆菌和巨大芽孢杆菌分别接种于固体培养基上,培养;(2)种子培养:(3)分纯;(4)发酵;(5)细胞磷脂组的提取;(6)LC-MS检测;(7)多元统计分析;(8)过程分析;本发明通过对细胞总磷脂的提取和分析,多元统计方法分析所获得的磷脂组学数据,对不同传代数的维生素C生产菌株在单独和混合培养条件下的磷脂分子分别进行定性和定量分析,找到与增强维生素C生产菌株两菌相互作用相关的磷脂分子和代谢途径的分析提供了方法,对以提高2-酮基-L-古龙酸为目的的菌种改造和培养条件优化具有重要的意义。

    一株高效代谢木糖的重组酵母菌株及用途

    公开(公告)号:CN103060217B

    公开(公告)日:2014-12-17

    申请号:CN201210507117.X

    申请日:2012-11-29

    申请人: 天津大学

    IPC分类号: C12N1/19 C12P7/06 C12R1/865

    CPC分类号: Y02E50/17

    摘要: 本发明公开了一株高效代谢木糖的重组酵母菌株(Saccharomyces cerevisiae)命名为SyBE005,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.6634,其具有高效代谢木糖产乙醇的能力。本发明的重组酵母菌株SyBE005能够有效的利用木糖发酵产生乙醇。乙醇产率达到理论得率的64%,副产物木糖醇的产率在12%以下,能够高效地转化木糖为乙醇,是优良的利用纤维素水解液的菌株。

    分析VC生产菌株传代过程中小分子代谢物变化的方法

    公开(公告)号:CN102680562B

    公开(公告)日:2014-04-16

    申请号:CN201210148033.1

    申请日:2012-05-14

    申请人: 天津大学

    IPC分类号: G01N27/62

    摘要: 本发明公开了一种分析维生素C生产菌株传代过程中小分子代谢物变化的方法,步骤:(1)混菌传代培养;(2)胞内小分子代谢物样品的制备和测定;(3)主成分分析;(4)过程分析:将小分子代谢物标志物的含量按照不同传代时间制成图表,观察并分析小分子代谢物标志物变化的规律,检测出维生素C生产菌株传代过程中细胞内小分子代谢物的变化。本发明的方法通过对不同传代时间的巨大芽孢杆菌、氧化葡糖杆菌以及混菌的小分子代谢物分别进行定性和定量分析,找到与增强维生素C生产菌株两菌相互作用相关的代谢物分子和代谢途径,为提高2–酮基–L–古龙酸为目的的菌种改造和培养条件优化提供方向,为优化发酵过程,提高维生素C产量奠定基础。

    一株高效代谢木糖的重组酵母菌株及用途

    公开(公告)号:CN103060217A

    公开(公告)日:2013-04-24

    申请号:CN201210507117.X

    申请日:2012-11-29

    申请人: 天津大学

    IPC分类号: C12N1/19 C12P7/06 C12R1/865

    CPC分类号: Y02E50/17

    摘要: 本发明公开了一株高效代谢木糖的重组酵母菌株(Saccharomyces cerevisiae)命名为SyBE005,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.6634,其具有高效代谢木糖产乙醇的能力。本发明的重组酵母菌株SyBE005能够有效的利用木糖发酵产生乙醇。乙醇产率达到理论得率的64%,副产物木糖醇的产率在12%以下,能够高效地转化木糖为乙醇,是优良的利用纤维素水解液的菌株。

    分析VC生产菌株传代过程中小分子代谢物变化的方法

    公开(公告)号:CN102680562A

    公开(公告)日:2012-09-19

    申请号:CN201210148033.1

    申请日:2012-05-14

    申请人: 天津大学

    IPC分类号: G01N27/62

    摘要: 本发明公开了一种分析维生素C生产菌株传代过程中小分子代谢物变化的方法,步骤:(1)混菌传代培养;(2)胞内小分子代谢物样品的制备和测定;(3)主成分分析;(4)过程分析:将小分子代谢物标志物的含量按照不同传代时间制成图表,观察并分析小分子代谢物标志物变化的规律,检测出维生素C生产菌株传代过程中细胞内小分子代谢物的变化。本发明的方法通过对不同传代时间的巨大芽孢杆菌、氧化葡糖杆菌以及混菌的小分子代谢物分别进行定性和定量分析,找到与增强维生素C生产菌株两菌相互作用相关的代谢物分子和代谢途径,为提高2–酮基–L–古龙酸为目的的菌种改造和培养条件优化提供方向,为优化发酵过程,提高维生素C产量奠定基础。

    混菌进化传代培养提高2-酮基-L-古龙酸产量的方法

    公开(公告)号:CN102352403A

    公开(公告)日:2012-02-15

    申请号:CN201110314740.9

    申请日:2011-10-17

    申请人: 天津大学

    摘要: 本发明公开了混菌进化传代培养提高2-酮基-L-古龙酸产量的方法,包括如下步骤:(1)固体培养;(2)种子培养,将巨大芽孢杆菌和氧化葡糖杆菌接种到新的种子培养基中,在28-35℃,200-280r/min摇床振荡培养,以24h-48h为传代周期,以体积比为1%-10%为传代比接入新的种子培养基中,传代50-80天;(3)分纯;(4)发酵;本发明的方法通过混菌进化传代培养数十代后,能明显提高巨大芽孢杆菌和氧化葡糖杆菌的生长速度和氧化葡糖杆菌产2-酮基-L-古龙酸效率,从而可提高对培养基的利用效率,提高L-山梨糖的转化效率10%左右。

    一种酿酒酵母菌株及在共发酵葡萄糖和木糖产乙醇的用途

    公开(公告)号:CN102965291B

    公开(公告)日:2015-04-22

    申请号:CN201210507118.4

    申请日:2012-11-29

    申请人: 天津大学

    IPC分类号: C12N1/18 C12P7/06 C12R1/865

    CPC分类号: Y02E50/17

    摘要: 本发明公开了一种酿酒酵母菌株及在共发酵葡萄糖和木糖产乙醇上的用途,酿酒酵母菌株(Saccharomyces cerevisiae)命名为SyBE003,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.6633,其具有共发酵葡萄糖和木糖产乙醇的能力。本发明的酿酒酵母菌株能够有效的共利用葡萄糖和木糖发酵产生乙醇。对葡萄糖和木糖的利用率都达到了100%,乙醇产率达到理论得率的80%,副产物木糖醇的产率在2%以下,能够高效地转化五六碳糖为乙醇,是优良的利用纤维素水解液的菌株。

    一种分析维生素C生产菌株传代过程磷脂组变化的方法

    公开(公告)号:CN102586386B

    公开(公告)日:2014-05-28

    申请号:CN201210044060.4

    申请日:2012-02-24

    申请人: 天津大学

    摘要: 本发明公开了一种分析维生素C生产菌株传代过程磷脂组变化的方法,包括如下步骤:(1)固体培养:取氧化葡糖杆菌和巨大芽孢杆菌分别接种于固体培养基上,培养;(2)种子培养:(3)分纯;(4)发酵;(5)细胞磷脂组的提取;(6)LC-MS检测;(7)多元统计分析;(8)过程分析;本发明通过对细胞总磷脂的提取和分析,多元统计方法分析所获得的磷脂组学数据,对不同传代数的维生素C生产菌株在单独和混合培养条件下的磷脂分子分别进行定性和定量分析,找到与增强维生素C生产菌株两菌相互作用相关的磷脂分子和代谢途径的分析提供了方法,对以提高2-酮基-L-古龙酸为目的的菌种改造和培养条件优化具有重要的意义。